单核细胞增生李斯特氏菌是一种革兰氏阳性食源性人类病原体，使孕妇严重感染并终可能导致流产、死胎、新生儿李斯特氏菌病和脑膜炎或成人和青少年原发性菌血症。伊氏李斯特氏菌对人类的致病性不确定（1）。由于单核细胞增生李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌具有相似的生化特性，传统培养基（PALCAM培养基）不能区分。
单增李斯特氏菌显色培养基
（L. mono Differential HiVegTM Agar Base）
货号 | 产品 | 原装品名 | 规格 | 货期 | 储存 | 效期 |
MV1540 | 单增李斯特氏菌显色培养基（ALOA法） | L. mono Differential HiVegTM Agar Base | 100g(1.3L) 500g（6.9L） | 4-6周 | 2-8°C | 详见产品包装 |
FD214-5VL | 添加剂1 | L. mono Enrichment Supplement I | 5管(2.5L) | 4-6周 | -20°C | 详见产品包装 |
FD212-5VL | 添加剂2 | L. mono Selective Supplement I | 5管(2.5L) | 4-6周 | 2-8°C | 详见产品包装 |
FD213-5VL | 添加剂3 | L. mono Selective Supplement II | 5管(2.5L) | 4-6周 | 2-8°C | 详见产品包装 |
应用
用于选择性分离鉴别单核细胞增生李斯特氏菌。
背景
单核细胞增生李斯特氏菌是一种革兰氏阳性食源性人类病原体，使孕妇严重感染并终可能导致流产、死胎、新生儿李斯特氏菌病和脑膜炎或成人和青少年原发性菌血症。伊氏李斯特氏菌对人类的致病性不确定(1)。由于单核细胞增生李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌具有相似的生化特性，传统培养基（PALCAM培养基）不能区分。
原理
Ottoviani 和 Agosti (1,2)开发了单核细胞增生李斯特氏菌鉴别基础培养基，用于从食物和动物饲料中选择性分离鉴别单核细胞增生李斯特氏菌。这款李斯特氏菌显色培养基在该培养基配方上略作改良。它在制备时用无疯牛病风险的植物蛋白胨取代了动物蛋白胨。
该培养基中的HiVeg蛋白胨1号、（HiVeg）水解物、酵母粉和丙酮酸钠提供了细菌生长所必需的营养和氮源物质。葡萄糖是可发酵的碳水化合物。氯化钠维持渗透压平衡。磷酸盐是缓冲液成分。氯化锂和选择性添加剂（FD212和FD213）抑制伴随的菌群生长，而允许李斯特氏菌生长。李斯特氏菌水解显色底物，产生绿色菌落。从其它李斯特氏菌中鉴别出单核细胞增生李斯特氏菌，是依据其*的磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C （PIPLC）活性。磷脂酶C水解培养基中的底物添加剂（货号FD214）导致单核细胞增生李斯特氏菌菌落周围产生不透明的晕环。
培养基组分
成份 | 克/升 |
HiVeg蛋白胨1号 | 18.000 |
（HiVeg）水解物 | 6.000 |
酵母粉 | 10,000 |
丙酮酸钠 | 2.000 |
葡萄糖 | 2.000 |
甘油磷酸镁 | 1.000 |
* | 0.500 |
氯化钠 | 5.000 |
氯化锂 | 10.000 |
无水* | 2.500 |
显色底物 | 0.050 |
琼脂 | 15.000 |
终pH（25℃）7.2±0.2
配置
36.02g干粉溶于 460ml蒸馏水。加热沸腾使干粉*溶解。15磅（121℃）灭菌15分钟。取李斯特氏菌增菌添加剂（货号FD214）1管放置室温融化。取李斯特氏菌选择性添加剂I（货号FD212）1管,添加10ml无菌蒸馏水复溶。取李斯特氏菌选择性添加剂II（货号FD213）1管，添加2ml 0.2N氢氧化钠，再加3ml无菌蒸馏水复溶。待460ml培养基冷却至45-50°C，无菌加入以上复溶的3种添加剂。混匀并倾注于无菌平皿中。
警告：氯化锂是有害的。避免身体接触和吸入蒸气。一旦与皮肤接触，应用大量水冲洗。
质量控制
外观：奶油色至黄色均一自由流动粉末。
成胶性：牢固，与1.5％琼脂凝胶相当。
成品颜色和透明度：淡琥珀色，不透明凝胶。
配比反应：25℃时7.2%（7.2g/100ml蒸馏水）水溶液，pH: 7.2±0.2
pH值：7.00-7.40
培养反应
培养基无菌加入3种添加剂（FD212,FD213,FD214）制备好后，接种下列菌种，35-37℃孵育24-48小时后观察培养反应。
有机体 | 接种（CFU） | 生长 | 回收率 | 菌落颜色 | PIPLC活性 |
白色念珠菌（ATCC 10231） | ≥103 | 抑制 | 0% | ||
粪肠球菌（ATCC 29212） | ≥103 | 抑制 | 0% | ||
大肠埃希氏菌（ATCC 25922） | ≥103 | 抑制 | 0% | ||
英诺克李斯特氏菌（ATCC 33090） | ≥103 | 旺盛 | ≥50% | 蓝绿色 | （-） |
格雷氏李斯特氏菌（ATCC 19120） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 蓝绿色 | （-） |
伊氏李斯特菌（ATCC 19119） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 蓝绿色 | （+）菌落周围有不透明晕环 |
单核细胞增生李斯特氏菌（ATCC 19112） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 蓝绿色 | （+）菌落周围有不透明晕环 |
斯氏李斯特氏菌（ATCC 35967） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 蓝绿色 | （-） |
威尔斯李斯特氏菌（ATCC 43549） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 蓝绿色 | （-） |
铜绿假单胞菌（ATCC 27853） | ≥103 | 抑制 | 0% |
参考文献
1.Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 a), Industrie Alimentari 36, 1-3.
2.Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 b), Quimper Froid Symposium Proceedings p. 6, A.D.R.I.A. Quimper,France, 16-18 June 1997.
产品引用文献
1. H Momtaz，S Yadollahi. Molecular characterization of Listeria monocytogenes isolated from fresh seafood samples in Iran.Diagnostic Pathology, 2013,8(1):1-6
2. MM Yadav，A Roy，B Bhanderi，C Joshi.Pheno-genotypic characterization of Listeria monocytogenes from bovine clinical mastitis.Buffalo Bulletin,2010 , 29(1):29-38
3. Nitin Chandhrakant Dudhe,et al. InVitro Characterization of Listeria monocytogenes Isolates by Haemolysis, Camp, Piplc Assay with Protein Profiling and Antibiotic Resistance Recovered from Nagpur Region.Advances in Animal and Veterinary Sciences.2014,2(6): 321–328
4. Shole Yadollahi, Hassan Momtaz,Monir Doudi,Elahe Taj bakhsh. The objective of this study was to isolation and characterization of Listeria species and determines Listeria monocytogenes serotypes in fresh fish,shrimp, crab and lobster in Isfahan and Shahrekord, Iran.International journal of Advanced Biological and Biomedical Research.2013,1(5):493-504
5. Sanjita Sharma, Vishnu Sharma, Dinesh Kumar Dahiya, Aarif Khan, Manisha Mathur, Amit Sharma.Prevalence, Virulence Potential, and Antibiotic Susceptibility Profile of Listeria monocytogenes Isolated From Bovine Raw Milk Samples Obtained From Rajasthan, India.Foodborne Pathogens & Disease, 2017,14(3):132
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