D1101L1123 PikoGreen dsDNA quantitation reagent

PikoGreen dsDNA quantitation reagent具有以下优势：①灵敏：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省样品；②特异性强；③耐受性好；④线性范围宽：PikoGreen dsDNA染料测定DNA浓度，在100pg/ml-100ng/ml范围内呈良好线性；荧光计兼容。⑤容易使用：在样品中加入染料，等待5-6分钟染色，然后读数即可。

PikoGreen dsDNA quantitation reagent(优于PicoGreen)

PikoGreen dsDNA quantitation reagent使用方法

1. PikoGreen工作液的配制

使用前将PikoGreen dsDNA定量试剂回温至室温；PikoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的（共10管），实验当天，根据实验需求用1×TE按1:200 的比例稀释适量定量试剂浓缩液。例如要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品，可向19.9mL 1×TE 中加入100μL PikoGreen dsDNA 定量试剂。工作液见光易降解，尽量在配好后几小时内使用。

2. 配制标准品DNA溶液

1) 用1 X TE溶液溶解dsDNA制备1μg/mL dsDNA 。根据在1cm 光程长度的比色杯中A260nm时的吸光度确定DNA 浓度；相应于1μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。标准液常用小牛胸腺DNA制备，PikoGreen 试剂测定法在通常污染*的几种复合物存在的条件下仍能保持线性良好，但是，为了得到有效的对照处理，被用来做标准曲线的dsDNA 溶液要用和实验样品相同的方式来处理，并且应该包含相同的可能存在的污染物。

2) 制备从0.5ng/mL 到500ng/mL（见表1）单重复8 个点的标准曲线。配制一系列的标准DNA 溶液，然后与等体积的PikoGreen 工作液混和，放入1 x 1cm 比色杯中。混合相同体积的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作为空白对照,避光于室温下放置2-5 分钟。

表1: 用1 x 1cm 比色杯时DNA 标准浓度配制参考

3) 当用微量检测皿适配器时，PikoGreen 测定也可在较低的测定体积（50μL 到200μL）内完成。产生从1ng/mL 到100ng/mL（见表2）的标准曲线，配制一系列的标准DNA 溶液，然后与等体积的PikoGreen 工作液混和，将至少50μL 溶液转移到微量检测皿中。确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部经常可以驱散气泡。避光于室温下放置2-5 分钟。

表2：用微量检测皿DNA 标准浓配制参考

4) 孵育后用合适的荧光计测量样品荧光值。Ex/Em=480nm/520nm，为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间*。用荧光值zui大的样品校正仪器。

5) 用检测数据与DNA标准溶液浓度做回归分析，制作标准曲线。

3. 样品分析

1) 用1 x TE 稀释待测DNA 样品至需要的体积（1x1cm 比色杯需1.0mL，微量检测皿需25-100μL）。对样品高度稀释可以确保任何污染物都被zui大限度地冲淡。然而，也要避免取样体积太小而无法精确吸取的情况。

2) 在每个样品中加入等体积PikoGreen 工作液，混合好，将混合物移入合适的比色杯，避光于室温下放置2-5 分钟。

3) 检测、读取荧光值，换算样品中dsDNA浓度。可以对样品进行不同的稀释处理重复测定以确保结果的准确性。

PikoGreen dsDNA quantitation reagent运输和保存方法

       常温运输。4℃避光干燥保存，有效期6个月。

PikoGreen dsDNA quantitation reagent注意事项

1) PikoGreen定量试剂含有DMSO，PikoGreen 是结合dsDNA，操作时采取适当防护，戴手套小心操作；

2) 尽管常见污染物不会影响PikoGreen 检测dsDNA浓度（见PikoGreen耐受污染物列表），但是当样品中dsDNA浓度太低，RNA, ssDNA浓度超过dsDNA 10倍以上时，RNA, ssDNA等污染还是会对检测结果产生较大干扰，在此种情况下，RNA 酶可以消除RNA干扰, RNA 酶A、酶T1 、核酸酶S1 结合能除去ssDNA干扰，从而保证样品荧光值是由dsDNA 产生。