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黄头杆状病毒PCR检测试剂盒探针法说明

2020年08月12日 14:56人气：564 来源: 上海一研生物科技有限公司 >> 进入该公司展台

　　下面我公司技术人员与大家唠唠黄头杆状病毒PCR检测试剂盒探针法：

　　探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。

　　取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。

　　②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

　　③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积yibing醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

　　④RNA清洗移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%yi醇(75%yi醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。

　　⑤RNA干燥小心吸去大部分yi醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

　　⑥溶解RNA沉淀溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液浓度和纯度。

（本文来源：上海一研生物科技有限公司，转载请注明出处）

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