实用小贴士之液相色谱柱如何使用？

色谱柱是高效液相色谱仪的重要组成部分，在色谱仪分析系统中起着分离作用，是色谱分析的核心部件，对高效液相色谱柱的正确使用不仅能延长色谱柱的使用寿命，还能有效保证实验结果。

以下简单介绍液相色谱柱

在使用过程中应当注意的问题

01

性能测试

新色谱柱使用前，应进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考依据 (柱性能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异有所不同，在测试中需保证方法一致性）。

02

流动相的配制

液相色谱是通过样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

• 流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。

• 流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应。

• 流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时既能得到好的分离效果，同时又降低柱压，延长柱子的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。

• 流动相的物化性质与使用的检测器相适应。

• 流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

• 流动相配制好后，一定要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体。

03

新色谱柱使用前冲洗步骤

1、首先查看色谱柱的说明书，注意色谱柱封存的溶剂、推荐流速、pH值、耐受柱压、及使用温度等信息。

2、如分析使用的流动相与色谱柱内储存的溶剂混溶，可以直接使用流动相参照色谱柱说明书中推荐的流速、温度等条件冲洗色谱柱20倍柱体积以上。如果分析条件使用的流动相与色谱柱内储存的溶剂不混溶，请选择与色谱柱内储存溶剂和流动相都混溶的溶剂，作为置换溶剂，逐步置换到分析使用的流动相。每次置换均应冲洗色谱柱20倍柱体积以上。

04

日常使用注意事项

1、请使用HPLC级别以上的试剂作为流动相。

2、流动相要用0.45um孔径以下的微孔滤膜滤过。

3、流动相的pH值不能超出色谱柱的适用范围。

4、注意流动相的流动方向要与色谱柱标识的方向一致。

5、容易滋生微生物的流动相不要存放过久，要及时换新，以免微生物滋生污染色谱柱。

6、色谱柱分析结束后要及时*冲洗。

7、长时间不用的色谱柱要将流动相置换为色谱柱保存的溶剂，并两端用堵头封死保存。

8、色谱柱要避免剧烈碰撞、跌落等。

05

流动相流速的选择

因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不用的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求较佳柱效，应使用*流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1mL/min，对于内径4.0mm柱，流速0.8mL/min为更佳。当选用*流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间（如使用反相柱时，可适当增加有机试剂甲醇或乙腈的含量）。

液相色谱柱在色谱分析中起着至关重要的角色，是样品分离的核心，正确使用色谱柱才能达到更好的理想的分离效果，提高色谱柱的使用寿命。

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