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薄层色谱的操作方法

2019年11月28日 11:02人气：3260

　　【仪器网使用手册】薄层色谱是一种较新的色谱法，兼具柱色谱和纸色谱的优点，能快速分离和定性分析少量物质。薄层色谱性能优异，操作也较简单。

　　1.选择吸附剂

　　吸附剂一般要求直径为10～40μm，需要根据被分离物质的性质选择，常用的吸附剂有以下几种。

　　硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离

　　氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离

　　纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。

　　聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离。

　　2.制备薄层板

　　薄层板的质量将决定分离的效果，应该尽量均匀且厚薄一致。薄层板的制备主要有两种方法：

　　①将洁净干燥的玻璃板置于铺板器中间，在铺板槽中倒入糊状物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。

　　②将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。

　　制备完成后还需要将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干，然后放在烘箱内加热活化。(硅胶板需在烘箱内慢慢升温至105-110度后保温30分钟；氧化铝板需在200-220度烘4小时)

　　3.点样

　　将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成1%的溶液。用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上。

　　4.展开

　　薄层层析有多种展开方式，可分为上行、下行、双向展开等，这里介绍一下上行法和下行法。

　　上行法：在缸中加入足够量的展开剂，将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，密封缸盖，待展开前沿离薄板上端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。

　　下行法：在展开缸的盖子上装一个小钩，将展开的纸片钩住，并通过一滤纸条将展开剂和纸片连起来。待展开剂前沿离纸片下端 1cm时，取出纸片，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。

　　5.显色

　　晾干薄板溶剂后对板上的组分进行定位。将显色剂以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。此外对于无色样品，可采用带荧光剂的吸附剂做薄板，展开后在紫外光下显暗色斑点；对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中，与碘作用呈棕色斑点。

　　6.Rf值计算

　　用尺测量原点到色斑中心的距离除以原点到溶剂前沿的距离。不同的物质往往有着不同的Rf值，根据这个就可以简单判断它们是否是同一物质，但Rf值相同之后，还要进行进一步判断才能确定他们是否为同一个物质。

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