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制备型液相色谱仪应如何选择操作条件

2019年11月25日 11:15人气：1267

　　【仪器网使用手册】制备型液相色谱仪目的是对产品的单体进行提取和纯化，与蒸馏、萃取等纯化方法相比制备型液相色谱法更有效，但对操作的要求也更高。为保证制备型液相色谱仪可以达到理想的实验效果，需要谨慎选择操作条件，减少影响分离效果的因素。

　　色谱柱的选择

　　色谱柱的容量有一定限制，每种色谱柱都有自己的负载能力，因此样品的导入值上限需要根据所用的色谱柱确定。色谱柱与大样品量的关系如下：

　　1.色谱柱内半径越大，柱子的负载能力越高。

　　2.分配系数K增加，柱子的负载能力也会增加。同时，溶质的保留体积同样也会增加。

　　3.色谱柱的填充方法影响着填充密度，用良好方法填充的柱子密度趋近它的大值，柱子的样品量和分辨率同样也会趋近大值。

　　4.采用表面积大的吸附剂虽然会减弱色谱系统的速度和适用范围，但可以增加柱子的负载能力。

　　5.柱子的负载能力还随着柱子的长度增加而增长，但柱子过长会损失柱效。

　　6.填料颗粒的大小与柱子负载量也呈正相关关系。

　　样品的溶解

　　样品在溶剂里的溶解度会影响注入的大样品量。在流动相里难溶解的物质通常不能充分分离或分辨率比较低，因此需要先将样品溶解在另一种溶剂中，再将这种溶液送人色谱分离系统。中间溶剂的选择很重要，并且需要经验。

　　流动相的纯度

　　流动相的纯度与样品中的纯度息息相关。在分离组分特性相近或痕量组分时，流动相里的杂质还可能污染色谱柱，影响分离效能。因此流动相须保证纯净。

　　流动相的流速

　　流动相的流速与分离速度、分离效率相关，流速越快分离速度越快，但分离效率越低，因此需要选择合适的速度保证速度与效率并重。

　　固定相的选择

　　为了分辨效果，应尽量选择吸附色谱。从填料的容量看，全多孔型比表面多空型好；从固定相微粒的大小看，30~50μ较常用。

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