电泳仪的维护与保养

　　凝胶电泳仪通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法（如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部分提纯分子。
　　
　　一、使用方法
　　
　　该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆技术操作。
　　
　　二、产品应用
　　
　　凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学：1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）分离，也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行（SDS-PAGE），或者非变性凝胶电泳，或二维电泳。SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳图。3.毛细管电泳。4.酶谱法（zymography）。5.变性梯度胶凝电泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis，DGGE）。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力*,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。
　　
　　琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:
　　
　　1、DNA的分子大小：线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。
　　
　　2、琼脂糖浓度
　　
　　一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%,DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
　　
　　3、DNA分子的构象
　　
　　DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动zui快,而开环双链DNA移动zui慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。
　　
　　三、维护与保养
　　
　　电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳仪电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳仪电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求电泳仪必须有良好接地端，以防漏电。
　　
　　电泳仪通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然电泳仪内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致电泳仪损坏。
　　
　　由于电泳仪不同介质支持物的电阻值不同，电泳仪电泳时所通过的电流量也不同，其电泳仪泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故电泳仪不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
　　
　　在总电流不超过电泳仪额定电流时(zui大电流范围)，可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则容易影响电泳仪寿命。
　　
　　某些特殊情况下需检查电泳仪电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，容易造成不必要的人为电泳仪损坏。
　　
　　使用过程中发现电泳仪异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电泳仪电源，进行检修，以免发生意外事故。