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脉冲电泳仪的原理与操作

2021年08月05日 11:40人气：2499

　　脉冲场电泳是一种分离大分子DNA的方法，脉冲电泳仪能选择0°-360° 内的任何脉冲角度，用一个系统就能完成染色体和质粒DNA 的快速分离。通过逐渐改变电泳过程中的转换时间来转换时间梯度，从而增加片段迁移率。另外，每个载体均可设置电压及转换时间。一个电泳最多能融合8 个不同的阶段，以优化样品中亚组分片段的分离。

　　脉冲电泳仪工作的原理

　　脉冲电泳仪采用旋转脉冲场，电极安置在转子上，由转子带动电极以任意角度旋转，产生均一的重复电场。在脉冲场凝胶电泳中，电场不断在两种方向(有一定夹角，而不是相反的两个方向)变动。由于DNA分子带有负电荷，会朝正极移动。相对较小的分子在电场转换后可以较快转变移动方向，而较大的分子在凝胶中转向较为困难。因此小分子向前移动的速度比大分子快，最终达到分离的目的。

　　脉冲电泳仪*新颖的脉冲场设计，由转子带动电极以任意角度旋转，产生均一的重复电场，分离范围大，可分离长达8Mb的DNA片段。同时具有较高的分辨率高，可轻易地分辨线性和环状的DNA，对大的环状DNA分离效果更佳。

　　脉冲电泳仪的基本操作

　　脉冲电泳仪的使用分为电泳前与电泳后，电泳前半小时需要检查冷凝系统，确认管道连接密闭，不漏气。然后在电泳槽内加入约2.2升合适的电泳液。最后接通主机和冷凝泵电源，开启主机开关，主机自检结束后，开启冷凝系统开关按“set temp”键调节需要的电泳温度，按“actual temp”显示实际温度。调节泵的速度为“100”左右。

　　半小时后操作者需要将加好样的凝胶连同底座一起放入电泳槽内的黑色方框内，并保证电泳液超过胶面1~2mm，盖好电泳槽盖，将冷凝泵速度调节至“50”，以防凝胶被冲走。并且在主机上设置电泳程序，按“start”键，即可进行电泳。此时可观察到电泳槽内电极开始出现气泡。

　　电泳开始后，“high voltage”灯亮，此时切不可打开电泳槽盖进行操作，以免发生触电危险。电泳结束后，“high voltage”灯灭。先依次关掉冷凝系统，主机开关，然后可取出凝胶，最后放出使用过的电泳液。若长时间不用，需用蒸馏水冲洗电泳液循环系统，晾干。

　　目前，脉冲电泳仪已经被广泛应用到生物、微生物种系鉴定、分子流行病学的研究、基因组文库或大片段质粒研究、基因物理图谱绘制以及DNA的损伤和修复等研究当中。该设备的电泳槽、脉冲角度、时间转换梯度等要素都是选择产品时的重要参考因素。

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