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联系与区别丨HPLC中的相对响应因子与相对校正因子

2021年03月02日 15:45人气:314

  作为实验室常见的分析手段之一,高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等。由高效液相色谱原理设计而成的机器,即我们在做分析实验中经常使用的高效液相色谱仪。HPLC主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物等。
 
  HPLC的检测流程和原理:在检测系统中,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于不同的分配系数,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,样品溶液中组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样本浓度被转换成电信号传送到记录仪,终数据以图谱形式输出。
 
  在样品溶液中,不可避免的会有杂质,这时候就要引进“相对响应因子”和“相对校正因子”的概念。
 
  相对响应因子(RRF)一般应用于原料药或者药物制剂色谱分析方法中,对有关物质(如杂质或者降解杂质)的精确定量或者活性药物原料(API)的纯度检查。作为重要的色谱方法学参数,RRF的值取决于化合物本身的紫外吸收光谱性质以及检测器波长,准确的RRF值对相关物质/杂质研究非常重要。
 
  相对校正因子的计算方法为:
 
  F=(A杂/C杂)/(A样/C样)
 
  在中国药典中,“加校正因子的主成分自身对照法”规定计算方法为:
 
  色谱图上各杂质的峰面积,分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较,计算各杂质含量。这里规定的“校正因子”计算方法是按内标法校正因子:
 
  F=(A内标/C内标)/(A对照/C对照)
 
  相对响应因子(RRF)与校正因子F的关系如下:
 
  F=1/RRF= Slope 主峰/ Slope imp
 
  其中:Slope imp是指对应杂质的斜率,Slope 主峰是指主峰的斜率。
 
  需要注意的是,相对响应因子的数值不是一成不变的,一种物质在某种特定条件下,它的相对响应因子是针对自身而言的,如果条件改变,则响应因子数值也有可能改变。
 
  在使用HPLC时,应当考虑相对相应因子的影响,以免对数值造成误差过大。
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