T1410 T4 DNA 连接酶 常用试剂

T4 DNA 连接酶 常用试剂
别名
T4 DNA连接试剂盒
英文名称
T4 DNA ligase
规格
60U
储存条件
-20℃
单位
瓶

T4 DNA 连接酶  常用试剂

T4 DNA 连接酶  常用试剂产品说明：

该酶在以ATP 做辅酶的情况下，可以催化相邻DNA 链的 5'-磷酸集团和 3'-羟基之间的链接反应。平末端和粘性末端均可。此酶液可以催化双链 RNA 与双链 DNA 连接，但不能催化单链核酸的连接。 

活性单位定义：

1 个 Weiss 活性单位是指在 ATP-PPi 交换反应中，37℃ 、20min 内将 1nmol[32PPi]转换为 Norit 可吸收形式所需的酶量。1 个 Weiss 活性单位相当于约 200 个粘性末端连接单位。1 个粘性末端连接 单位 ：20μL 反应体系 ( 50mM Tris-HCl pH7.5 ) ， 10mM MgCl2 ， 10mM DTT, 1mM ATP,25μg/ml BSA,0. 12μM (300μg/ml 的 5'DNA 末端)中，在 16℃、30min 内 50%连接 Hind III 酶切的 Lambda DNA 产物所需要的酶量。

注意事项：

1 、载体 DNA 和连接片段的摩尔比：对于不同的载体和DNA 片段，要取得成功的连接，应分别建立具有不同摩尔数比例的连接反应，在大多数情况下，DNA 片段的摩尔数应控制在载体 DNA摩尔数的3- 10倍。 

2 、10×T4 DNA Ligase Buffer 中含有 ATP，为避免 ATP 的降解，建议解冻后分装冻存于-20℃。10×T4DNA Ligase Buffer 在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。 

3 、平末端的载体与 DNA 片段连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。 

注意：如果向反应体系中加入 PEG 可以促进平末端的连接，但 PEG 可能导致cDNA 片段克隆产物出现串联体并抑制包装的反应。