UltiMate® 3000 XRS 赛默飞超快速液相色谱仪器

赛默飞高效液相色谱 （HPLC） 是柱色谱的一种形式，它在高压下将溶剂中的样品混合物或分析物（称为流动相）泵送通过带有色谱填料（固定相）的色谱柱。样品由氦气或氮气的移动载气流携带。HPLC 能够分离和鉴定任何样品中存在的化合物，这些化合物可以以低至万亿分之一的痕量浓度溶解在液体中。由于这种多功能性，HPLC 被用于各种工业和科学应用，例如制药、环境、法医学和化学品。

柱色谱
柱色谱中的固定相通常是细小的吸附剂固体；能够在其外表面上保持气体或液体颗粒的固体。柱色谱中通常使用的色谱柱看起来类似于巴斯德移液器（巴斯德移液器用作小规模柱色谱中的色谱柱）。首先用*或多孔板塞住色谱柱的狭窄出口，以支撑色谱柱填充材料并防止其从管子中逸出。然后将吸附剂固体（通常是二氧化硅）紧密地装入玻璃管中，制成分离柱。必须小心地将固定相填充到玻璃柱中，以形成材料的均匀分布。吸附剂的均匀分布对于尽量减少柱内气泡和/或通道的存在很重要。为完成色谱柱的制备，将用作流动相的溶剂通过干燥的色谱柱。然后称该柱是“润湿的”，并且在整个实验过程中该柱必须保持湿润。正确准备色谱柱后，将要分离的样品放置在湿柱的顶部。可以在链接中找到填充分离柱的照片。

组件
色谱法是有效的，因为混合物中的不同组分会以不同的程度被吸引到固定相的吸附剂表面，这取决于每种组分的极性及其*的结构特征，以及它与流动相的相互作用。使用柱色谱实现的分离基于与样品相关的因素。因此，与对流动相具有更高亲和力的组分相比，更容易被固定相吸引的组分将以更慢的速率向下迁移到分离柱。此外，分离效果取决于所用吸附剂固体的性质和流动相溶剂的极性。

固定相
用作固定相的吸附材料类型对于有效分离混合物中的组分至关重要。可以使用几种不同的固体。可以根据固体的粒度和活性来选择吸附材料。吸附剂的活性用其活性等级表示，活性等级是吸附剂对样品溶液中溶质吸引力的量度。具有高活性等级的固体是*无水的那些。硅胶和氧化铝是常用的吸附剂。氧化铝非常适合需要特定条件才能充分分离的样品。但是，使用非中性固定相时应非常谨慎，氧化铝固定相中 pH 值的升高或降低可能会导致混合物组分内发生化学反应。然而，硅胶的活性不如氧化铝，通常可用作溶液中大多数组分的吸附剂。二氧化硅它具有高样品容量，使其成为受欢迎的吸附材料。

流动相
还必须选择合适的流动相，以便更好地分离未知混合物中的组分。该洗脱液将根据其相对于样品和固定相的极性进行选择。使用强极性吸附剂固定相（如氧化铝）时，用作流动相的极性溶剂会被固定相吸附，这可能会置换混合物中的样品分子，并可能导致样品组分的洗脱变化很快。这将提供很少的样品分离，因此好用较低极性的溶剂开始洗脱，首先洗脱固定相上弱吸附的组分。也可以在分离过程中改变溶剂以改变极性，从而更及时地分别洗脱各种组分。高效液相色谱(HPLC)。

     快速色谱仪器通过对溶剂施加压力来使流动相通过色谱柱，以便更快地获得结果。然而，在快速色谱法中，仅对溶液内的系统施加中等压力。在 HPLC 中，高性能泵可以在色谱柱中施加高达 5000 psi 的压力。