F-DH5α感受态细胞

F-DH5α感受态细胞 南京赛泓瑞生物在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌 电转化感受态细胞和农杆菌电击感受态种类，*提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。

F-DH5α快速转化感受态细胞产品说明书
产品规格:

F-DH5α快速转化感受态细胞基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1
gyrA96 relA1 phoA
F-DH5α快速转化感受态细胞简要说明：
CMbio-DH5α菌株是实验室常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证 了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于蓝、白斑筛选-CMbio-
F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，无需 42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min 内完成转化、涂板操作.

-CMbio-pUC19 质粒检测转化效率可达 1~5×10 8cfu/μg DNA。-CMbio-
F-DH5α快速转化感受态细胞操作说明：
1、提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。-CMbio-
2、F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物） 并用手 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。-CMbio-
3、用 200 μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 LB 培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4、将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。

快速热激转化操作方法  (25min,可提高转化效率)：

一、F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。-CMbio-
二、42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB， 37℃，200 rpm  复苏 10 分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。-CMbio-
三、将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。
F-DH5α快速转化感受态细胞注意事项：
（一）F-DH5α快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步 骤操作：F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手 EP 管底轻轻混匀，冰中 静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂 板。-CMbio-
（二）感受态细胞在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存 放会降低转化效率，混入目的 DNA 时应轻柔操作。-CMbio-
（三）F-DH5α快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄*抗性平板时效率较高，若涂*或其他抗生素平板， 转化效率下降(因无孵育步骤，*等对菌体毒性较大)。若要提高*或其他抗性质粒的转化效率，可按热激 转化操作，增加孵育步骤。
F-DH5α快速转化感受态细胞其他*：