BJ5183 电转化感受态细胞

BJ5183 电转化感受态细胞 南京赛泓瑞生物在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌 电转化感受态细胞和农杆菌电击感受态种类，*提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。

BJ5183 Electro
BJ5183 Electroporation-Competent Cell

BJ5183 电转化感受态细胞基因型：


endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR(Strr)
BJ5183 电转化感受态细胞简要说明：

BJ5183 是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。--

BJ5183 菌株含有 sbcBCrecBC 双重突变，赋予 BJ5183 细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒质粒

{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或 pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。Strr 赋予 BJ5183 菌株*抗性。--
--BJ5183 电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效 率>1010cfu/μg DNA。
BJ5183 电转化感受态细胞操作说明：

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙 醇充分挥

发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中 静置 5 分钟充分降温。 2. 取-80℃保存的 BJ5183 电击感受态细胞插入冰中 5  分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 悬，DNA 浓度 不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50  μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪*参数，也可按所用 电转仪 *的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 锥形离心管等），向离心管中 补加 S.O.C. 培养基至 10 ml。37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂 板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。