F-*0感受态细胞

F-*0感受态细胞 南京赛泓瑞生物在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌 电转化感受态细胞和农杆菌电击感受态种类，*提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。

F-*0
F-*0 快速转化感受态细胞

F-*0 快速转化感受态细胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK  rpsL

(Strr)endA1 nupG
F-*0 快速转化感受态细胞简要说明：

*0 菌株来源于 MC1061，是目前实验室常用的感受态细胞之一，基因型与 DH10B 高度类似 (DH10B 为 galE15 型，而 *0 为 galU 型)。-CMbio-
*0 生长速度快，37℃，10 小时可见克隆。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。-CMbio-
-CMbio-F-*0 感受态细胞经特殊工艺制作，无需 42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min 内完成转化、 涂板操作，pUC19 质粒检测转化效率可达 1~5×108 cfu/μg DNA。
F-*0 快速转化感受态细胞快速转化操作方法  (10min)

1.  提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热 -CMbio-
2. F-*0 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用

手 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。-CMbio-

3. 用 200μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 2YT 或 LB 培养基上。-CMbio-

4. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13 h。-CMbio-

F-*0 快速转化感受态细胞快速热激转化操作方法  (25min,可提高转化效率)
1. F- *0 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用 手 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。-CMbio-
2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃，

200 rpm  复苏 10 分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。-CMbio-

3. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。-CMbio-

F-*0 快速转化感受态细胞注意事项：

1. F-*0 快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作： F-*0 感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂板。
2. 感受态细胞在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降 低转化效率，混入目的 DNA 时应轻柔操作。-CMbio-
3. F- *0 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄*抗性平板时效率较高，若涂*或其他抗生素平板，转化效 率下降(因无孵育步骤，*等对菌体毒性较大)。若要提高*或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操 作，增加孵育步骤。-CMbio-