葡聚糖凝胶G-25操作步骤

上市时间：2020-04-13

创新点：用途： 葡聚糖G系列凝胶产品属经典的分离纯化介质，在蛋白质、核酸、多糖、多肽、抗体、疫苗、天然药物等生物医药下游分离纯化中应用较广。

葡聚糖凝胶G-25操作步骤由上海古朵生物提供讲述，葡聚糖凝胶G-25（Sephadex G-25），吸水率是2.5mL/g干胶，葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀；G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同；葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶G-25操作步骤由上海古朵生物提供讲述，葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)，吸水率是2.5mL/g干胶，葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀；G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同；葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶G-25操作步骤

【操作步骤】

1、葡聚糖凝胶预处理：在室温下，将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀，凝胶体积不再变化。
注：在溶胀前，加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降，沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多，需要重复多次漂洗将其除去，防止层析时阻塞凝胶柱，影响流速。
2、装柱：将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层;装柱要均匀，可在凝胶耐受的操作压下装柱，装好的凝胶柱可以检测柱效，检测过滤柱装填是否合格。
凝胶层析分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度：分级分离时，一般需要 100cm 左右长的层析柱，柱高与直径之比为 20:1-100:1，柱高过高时，凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压，应当尽可能避免;分组分离(例如脱盐)时用短柱，柱高控制在40-50cm 以下，柱高与直径的比约为 5:1-10:1。
3、平衡：上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。
4、上样：分级分离时上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整，脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积;样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去，样品的粘度不能过高，否则影响分离效果。
5、洗脱方法:可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化。
6、在位清洗(CIP)：凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氢氧hua钠反向清洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
7、保存：凝胶柱暂时不用，可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，可加入0.02%叠氮hua钠防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生长。
 

【注意事项】

1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、请严格按照产品说明书上的要求进行归范化操作。
3、避免直接接触终止液和底物，如不小心接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
4、注意无菌操作，避免微生物污染。
5、试剂对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用。

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