C4058L1082 EZ Trans细胞转染液（23966）

EZ Trans细胞转染液（23966）是新一代的转染试剂，带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。除了具有阳离子脂质体（如：Lipo2000,3000）的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点。

EZ Trans细胞转染液（23966）产品说明

      EZ Trans 是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。
使用方法
1. 接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用*）。转染前 18-24 小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度
      大约在 80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。
2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物
      1）转染前将所有试剂置于室温 10 分钟。下面，以转染 24 孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表 1.：
      2）将 1 μg 质粒 DNA 稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
      3）将 3 μL EZ Trans 转染试剂稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
      注： 无血清的高糖 DMEM 培养基是稀释液， 不能使用含血清的培养基（ 包括 Opti-MEM） 进行 DNA 和 EZ Trans 转染试剂的稀释！因为 EZ Trans-DNA 转染复合物的形成过程不能含有血清。
      4）将稀释好的 EZ Trans 转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒 DNA 中，立即用移液枪吹吸 3-4 次。
      注： 此混合的顺序不能反向进行！
      5）室温放置 10-15 分钟，以形成 EZ Trans-DNA 复合物。

表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量

3. 转染细胞
1）将上述 80 μL EZ Trans-DNA 转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让 EZ Trans-DNA
复合物分散均匀。
2）在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞，转染后 12-18 小时，去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可
在转染 3-5h 后，添加 1/2 体积的包含 30%血清的生长培养基，在转染 12-18 小时后*去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液，
用含血清和抗生素的新鲜培养液。）
3）转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达，可根据需要在 24-48 小时内检测转染效率。
注： 筛选稳定转染细胞株， 可在上述操作后（ 转染细胞 24 小时后） ， 将细胞传代至新鲜的生长培养基中（ 将细胞稀释 10 倍以
上） ， 在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。 在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下， 约 1～2 周可筛选到耐药性克隆， 在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 

EZ Trans细胞转染液（23966）运输与保存方法

      常温运输，4℃保存，保质期12个月。

EZ Trans细胞转染液（23966）使用注意事项

      质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260nm / 280nm 比值确定 DNA
纯度（比值应该在 1.8～2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
      细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮
冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用 GIBCO 或者李记生物的胎牛血清培养细胞。 

特别提醒

1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。
如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为 70～80%。
2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI 复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI 复合物必须在无蛋白存在的条
件下形成。
4. 对大多数细胞来而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans 试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA 使用
1～4μL 体积线性 PEI 转染试剂进行优化。 

EZ Trans转染液用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）

附：几种细胞转染方法比较

几种细胞转染方法（试剂）特点比较表

Q：C4058L1080和C4058L1090有什么区别？

A：我们有两种，80是针对线性的，90是支链转染，比如慢性病包试剂用90比较好。  

Q：李记细胞转染液和PEI固体自行配制溶液相比的优势在哪里？

A：很多客户买固体很难把握的，固体非常不容易溶解，包装比较大，用的不多建议您选液体的，已做无菌处理，可以直接使用。

Q：接种细胞，必须用胶原酶消化？*不能用么？

A：胶原酶从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离但不受伤害。胶原酶消化的不是细胞表面，而是细胞间质。

         *消化作用于与赖氨酸或*相连接的肽腱，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。对细胞有轻微影响，进而影响后续转染效率及细胞活性，在一定程度上体现为转染试剂的毒性。

Q：使用方法提到，转染细胞时将复合物（40ul质粒稀释液+40ul 转染试剂稀释液）滴入到含细胞的培养皿中。此时含细胞的培养皿里面有含血清的培养基么？如果有，体积是多少？以24孔板为例，是0.5ml么？

A：培养皿中培养基成分为正常培养细胞的成分，原来培养时有血清，那就有。培养孔中培养液的体积也是正常情况，你说的对，如果是24孔板，那么体积应该是0.5ml

Q:转染细胞步骤中提到，去除含复合物的培养液之后呢？要加含血清的培养基么？加多少，以24孔板为例？加完培养基后继续培养？培养多久？

A:去除含复合物的培养基，过程是逐步的，有两个目的，一是尽可能提高转染效率，二是尽可能降低细胞毒性。减少EZ Trans-DNA复合物的过程，也是恢复到细胞正常培养基成分的过程。后续培养多久，说明书为建议时间，你可以通过实验摸索，要根据你的转染效率，基因表达情况确定。

Q:转染细胞步骤中提到，这里的7h，指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的7h，还是指加入复合物后转染7h?- 同样的，“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h，还是指加入复合物后转染24-48h？

A:所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算.