微生物检验是食品制造及流通过程中的卫生学检验和质量管理的重要项目。食品的细菌学检验通常采用琼脂平板菌数计数法, 一般需要2～ 3 天, 检验结果往往滞后。许多食品在生产当天就必须出售, 因此急需有即时性的细菌学检验方法。近年来, 国外普遍实行HACCP (食品制造过程中卫生管理认证) 制度, 更迫切需要在食品制作过程中能快速、简便检测食品生产环境清洁度的方法。A TP 生物发光法作为一种简便、快速的微生物检验方法和食品生产环境清洁度的检测方法, 近年来在国外倍受注目, 并得以广泛应用。
1 ATP 生物发光法的原理、步骤及特点A TP 广泛存在于各种活的生物体中, 活的菌体中也含有A TP。细菌死亡后, 在细胞内酶的作用下, A TP 将很快被分解掉。因此, 通过测定样品中的A TP 浓度, 即可推算出活菌数。A TP 生物发光法的检测步骤大体包括: 棉拭取样、样品A TP 萃取、添加荧光素和荧光素酶混合物、测定生物发光量、求出A TP 浓度和活菌数。通常, 细菌表层有细胞膜和细胞壁包裹, 故样品未经处理是不能测定A TP的。测定时需先将样品与微生物用A TP 提取试剂混合, 使细胞膜和细胞壁开孔, 提取出A TP。A TP 提取试剂是以表面活性剂为基质的试剂。然后, 再与荧光素和荧光素酶生物发光试剂作用, 用荧光仪测定A TP 与发光试剂反应的生物发光量。此种方法以往由于荧光素和荧光素酶价格昂贵而难以普及; 但是, 近年来荧光素酶已可通过基因重组大肠杆菌生产, 其价格大幅度下降, 因而使A TP 生物发光法在微生物的检测上得以迅速普及。
