物学实验中液氮罐胚胎冷冻储存技术

　　1.细胞培养过程中的应用

　　细胞培养的一般过程主要包括四个步骤：准备、材料提取、培养和冷冻恢复。为了储存细胞，特别是不易获得的突变细胞或细胞株，冷冻细胞。冷冻温度一般为196℃液氮温度，细胞收集到冷冻储存管中，加入含有保护剂(一般为二甲基亚砜或甘油)的培养液，以一定的冷却速度冷冻，最后储存在液氮中。在极低的温度下，细胞的保存时间几乎是无限的。

　　二、胚胎冷冻储存技术

　　胚胎冷冻储存技术是指在低温环境下使用低温保护剂储存胚胎的技术。该技术是由20世纪下半叶人工授精技术的广泛应用引起的。动物胚胎的冷冻保存原理是低温降低了胚胎中的变质反应速度，温度越小，胚胎保存时间越长。

　　目前已开发出慢速冷冻法、快速冷冻法、一步冷冻法、直接移植冷冻法、玻璃化冷冻法等多种胚胎冷冻保存方法。玻璃化冷冻法的步骤如下：

　　①将胚胎在室温下发人25%玻璃化溶液(VS液)中预处理15分钟。

　　②将预处理后的胚胎存放在高浓度(75%190%)的VS液中20-40分钟。

　　③将经过两步抗冻剂处理的胚胎直接储存在液氮中。

　　此外，还可以用液氮罐储存菌种、疫苗、骨组织、精子等成分，可以达到很好的长期储存效果。