2 、装柱说明
2.1 凝胶的预处理
Sephadex LH-20 为干粉，初次使用前必须进行预处理。溶胀过程中严禁使用磁力搅拌， 以
免使微球破碎。
加入足够的去离子水进行溶胀，室温 3 小时以上，使其充分膨胀。亦可选择 20-50%乙醇进 行
溶胀，溶胀不要选择纯有机溶剂。 Sephadex LH-20 样品 1g 在水中的床体积是
4.5-5.5ml，在纯乙醇中的床体积是 3.5-4.5ml。使用 Sephadex LH-20,可用 0.1M
NaOH 浸泡24小时，然后用去离子水清洗干净。
将溶胀好的微球按照 3:1(v/v)加入水或 buffer 搅拌使其形成均匀的 75%胶悬液。如果是
重复使用的可以将 20%乙醇倾去，加水或 buffer 搅拌均匀成 75%的胶悬液。
2.2 装柱材料及装柱溶液
层析柱：以 GE XK16/200 或宸乔 LK15200 为例进行进行介绍
装柱仪器：低压层析系统 装柱溶液：去离子水
注：所使用的材料及溶液应与色谱操作的温度一致；层析柱筛网
孔径为 28μm(500 目)或 18μm(800 目)。
计算所需介质的量：柱床体积为 1L 时所需 75%胶悬液约为 1*1.15/0.75=1.53L。
装柱：
1). 检查层析柱，确保各部件完整、干净。安装下柱头，拧紧 O 型圈后，将层析柱垂直固定 在
铁架台上，用水平仪检查并调整，使层析柱保持水平。
2). 层析柱中加入适量的装柱溶液，以除去柱子中的空气。关闭柱子出口，柱内保留 1-2cm
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高度的装柱溶液。
3). 用玻璃棒紧靠柱内壁引流，将胶悬液连续倒入层析柱中，以减少气泡的产生。介质自然
沉降至体积不再变化，此时介质和溶液出现分层，上层溶液*澄清。
4). 连接上柱头至低压层析系统，开泵以一定流速排出管路中残留的空气，暂停系统，将上
柱头安装至层析柱上，柱头下端距离胶面约 1cm，开泵以 30cm/h 流速压柱至柱床体积不
再变化。暂停系统，略拧松 O 型圈，向下转动调节杆使下端距离胶面 0.5-1cm。
5). 拧紧 O 型圈，开泵以zui大流速 70%压柱 3CV 以上，至柱床体积不再变化，在界面处做
好标记。
6). 关闭泵，关闭柱下端出口，使层析柱上端和泵断开，向下转动调节杆，至记号处以下 0-
0.5cm 停止，关闭上接口。装柱完成。
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