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绵羊产气荚膜梭菌酶联免疫分析试剂盒原理

关键词: 绵羊产气荚膜梭菌,CP-D,ELISA试剂盒
资料类型: docx
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上传时间: 2019年10月23日 15:13
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上传人: 上海一研生物科技有限公司
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资料简介

　　绵羊产气荚膜梭菌D型(CP-D)酶联免疫分析试剂盒

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　96T

　　使用目的：

　　本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中产气荚膜梭菌D型(CP-D)的表达。

　　实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊产气荚膜梭菌D型(CP-D)表达。用纯化的绵羊产气荚膜梭菌D型(CP-D)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中产气荚膜梭菌D型(CP-D)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的产气荚膜梭菌D型(CP-D)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中绵羊产气荚膜梭菌D型(CP-D)的存在与否。

　　试剂盒组成

　　标本要求

　　1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　绵羊产气荚膜梭菌D型（CP-D）酶联免疫分析试剂盒操作步骤

　　1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)

　　2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　绵羊产气荚膜梭菌D型（CP-D）酶联免疫分析试剂盒操作程序总结：

　　计算和结果判定：

　　试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

　　临界值(CUT OFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

　　阴性判定：样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为产气荚膜梭菌D型(CP-D)阴性

　　阳性判定：样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为产气荚膜梭菌D型(CP-D)阳性

　　绵羊产气荚膜梭菌D型(CP-D)酶联免疫分析试剂注意事项

　　1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

　　2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　5.底物请避光保存。

　　6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

　　7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

　　绵羊产气荚膜梭菌D型（CP-D）酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期

　　1.试剂盒保存：2-8℃。

　　2.有效期：6个月

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