zl-057268 人胸腺激酶缺陷细胞143B TK- 质粒载体网

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　　细胞名称人胸腺激酶缺陷细胞；143BTK-

　　形态特性上皮细胞样

　　生长特性贴壁生长

　　特征特性143B细胞是一株人的胸腺激酶缺陷细胞系，由WistarInstitute制备，为美国专，利细胞系，仅可作为研究用，不能用于商业目的。

　　培养条件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

　　传代方法1:3传代,2-3天传一代

　　传代情况C97

　　冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS

　　支原体检测阴性

　　STRSTR鉴定

　　同工酶

　　染色体

　　使用权限A类

　　参考文献

　　细胞培养步骤

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备DMEM培养基（含NaHCO31.5g/L；GIBCO,货号12800017，添加NaHCO31.5g/L)；优质胎牛血清，10%；L-glutamine(推荐gibco货号：35050-061)，2mM；双抗，1%；（可在*培养基中加入最，大耐药浓度18ug/ml的GEM)

　　2）细胞在传代和刚复苏时较为脆弱，中止液须为不含GEM的*培养基，且在细胞未贴壁期间和贴壁前期需用不含GEM的*培养基，待细胞生长状态稳定时再根据需要浓度添加GEM。

　　3）若细胞生长状态较为缓慢时，可适当降低GEM的浓度，或使用不含GEM的*培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的GEM浓度。

　　4）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　5）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。