细胞培养时产生细菌污染怎么办？

　　细胞培养实验中，经常会遇到诸如外源污染、真菌污染、支原体污染、操作不当等各种问题，为解救细胞，需要针对不同问题对症下药，那么，细胞培养时产生细菌污染该如何解决呢?

　　细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(μm)计。常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

　　一旦发生细菌污染较易发现，多数情况下培养液短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生，出现明显混浊现象;有时静置的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类;有的培养液改变不明显而又疑有污染，可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min，沉淀中加入无抗生素的培养液2ml，置于37℃培养，24h可得结果。

　　污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。一旦发现细胞被细菌污染，需要采取如下解决方案：

　　(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基;

　　(2) 培养环境用新洁尔灭擦拭且UV灭菌24小时;

　　(3) 培养试剂中加入P/S双抗。

　　此外，在细胞培养时应尽可能使用一次性耗材及成品培养基，以减少细菌污染的可能性。

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