合成着色剂又称合成色素,主要是以苯、甲苯等化工产品为原料,经过磺化、偶合、缩合、偶氮化等一系列反应制成。中国食品添加剂使用卫生标准列入的合成色素主要有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝等等。与天然色素相比,合成色素颜色更加鲜艳,不易褪色,且价格较低,色调多样,故被广泛应用。但是长期大量使用将会对身体造成伤害,因此需要对合成着色剂的添加量进行检测。
合成着色剂少量食用可经肝肾代谢排出体外,但是若长期或一次性大量食用素含量超标的食品,可能会引起过敏、腹泻等症状。当摄入量过大,超过人体器官负荷时,会在体内蓄积,对肾脏、肝脏产生一定伤害。胭脂红等染色剂还会使人体的免疫力下降,并且增加癌症的发病率,因此饮品中的着色剂的使用必须控制在合适的范围,而对着色剂含量的检测也具有十分重要的意义。
本实验参考《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》,采用我司新推出的聚酰胺固相萃取小柱对样品进行前处理,使用我司iChrom 5100液相色谱仪对着色剂标准品,线性以及加标回收率等进行检测方法验证,并且检测实际蔬菜汁中柠檬黄、胭脂红、日落黄的添加情况。
1.1设备与试剂
实验过程中其它玻璃器皿还包括棕色容量瓶(50mL、100mL)、移液枪(0——1000µL)、移液枪枪头(1mL、5mL)、一次性PVC手套、一次性口罩、50mL塑料离心管、10mL塑料离心管等若干。
1.2实验方法
【试剂及相关溶液配制】
0.02mol/L乙酸铵溶液:称取1.54g乙酸铵样品于1000mL水中充分溶解后,然后0.45µm滤膜过滤后备用。
混标储备液:准确称取柠檬黄、胭脂红、日落黄标准品各10mg,至50mL容量瓶中,用水溶解后定容即得200µg/mL的混标溶液。
标准混合工作液:移取不同体积的混标溶液,用流动相稀释,得到的浓度分别为100µg/mL、50µg/mL、40µg/mL、20µg/mL、10µg/mL、5µg/mL、1µg/mL。
【样品前处理】
样品提取
称取试样1.0 g(至0.001 g)于50 mL离心管中,加入6 mL 去离子水,涡旋30 s,超声振荡提取15 min,4000 r/min离心5 min,取上清液。剩余残渣再加入6 mL去离子水,重复操作一次。合并两次上清液。用20%柠檬酸溶液调节溶液pH=3——4,待上样。
SPE柱净化
(1)活化:净化前用5 mL甲醇、5 mL去离子水活化。
(2)上样和洗脱:将提取液以1 mL/min的速度过柱,弃去滤液,用5 mL淋洗液(甲醇:甲酸:水=4:2:4)淋洗,弃去淋洗液,将小柱抽干,再用6 mL 10%氨化甲醇溶液洗脱并收集洗脱液。
(3)重新溶解:45℃缓慢氮吹至近干,加2 mL 混合流动相(A:B=1:1)溶解。涡旋混合1 min,用0.45 μm滤膜过滤后,待上机测试。
【色谱条件】
流动相:A:甲醇;B:0.02mol/L乙酸铵溶液
色谱柱:SinoChrom ODS-BP 5µm 4.6×250mm
流速:1.0mL/min
检测波长:254nm
进样体积:10μL
柱温:30℃
1.3实验结果
【典型分析谱图】
【线性相关】
分别移取不同体积的标准储备液,配制浓度分别为1µg/mL、5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL、40µg/mL、50µg/mL、100µg/mL的标准混合工作液。按浓度由低至高进样分析,以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制校准曲线,柠檬黄、胭脂红和日落黄的线性相关性结果如下。
【小检出限】
本系统的基线噪声为25µV,根据3倍信噪比,仪器的小检出限分别为柠檬黄20ng/mL,胭脂红25ng/mL,日落黄18ng/mL。根据前处理方法计算,各目标物的方法检出限分别为柠檬黄20µg/kg,胭脂红25µg/kg,日落黄18µg/kg,参见表7。
【加标回收率】
添加水平为4.0mg/kg的果蔬汁样品,经过处理后分析,得到的加标回收率见表8。
结论:
采用我司新推出的聚酰胺固相萃取小柱对样品进行前处理,利用iChrom 5100液相色谱仪,参考《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》方法并对实验条件做进一步优化后,测得目标物线性关系优良,小检出限满足标准要求,加标回收率结果良好。
因此采用我司的iChrom5100液相色谱仪,利用该方法测试果蔬汁饮料中的合成着色剂含量时,仪器灵敏度高、定性和定量准确,良好的仪器精密度,能满足果蔬汁饮料中合成着色剂的含量测定。
参考文献:
[1] 《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》
[2] GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准
附录:
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