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如何用高效液相色谱测定呈味核苷酸二钠含量

2020年09月15日 14:06人气:0

  鸡精的主要成分是呈味核苷酸二钠和谷氨酸钠,其鲜味与呈味核苷酸二钠和谷氨酸钠的用量比例有关。因此呈味核苷酸二钠含量测定是评价鸡精质量的重要指标。常用的呈味核苷酸二钠测定法为紫外分光光度法和色谱法。其中,高效液相色谱法可以有效避免其他成分的干扰,是一种比较理想的检测方法。
 
  1.样品处理
 
  称取1g(精确至0.01g)样品于具塞塑料离心管中,加水超声提取10min定容至100ml容量瓶中,然后以9000rpm离心10min,取上清液1ml过微孔滤膜(0.45pm)。
 
  2.配置标准溶液
 
  标准储备液(1000mg/l)称取100mg(精确到0.1mg)的鸟苷酸二钠(GMP)和肌苷酸二钠(IMP)标准品,用水溶解并定容于100ml容量瓶中。
 
  3.色谱参数
 
  色谱柱:AgilentCis不锈钢柱(150mmx3.0mm(i.d.),5hcm);
 
  流动相:5:95(甲醇:乙酸铵溶液(pH=6.6));
 
  流速:0.4ml/min;
 
  进样量:5v;
 
  柱温:30℃;
 
  检测波长:254nm。
 
  4.标准曲线
 
  配制浓度分别为1、3、5、10、30、50、100μg/ml的GMP、IMP混合标准工作液,浓度由低到高检测,以浓度-峰面积作图,得到标准曲线回归方程。计算GMP、IMP的相关系数,检验响应值是否在标准曲线范围内。
 
  5.回收率
 
  对样品进行多次平行测定,计算回收率。
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