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如何用高效液相色谱测定呈味核苷酸二钠含量

2020年09月15日 14:06人气：1554

　　鸡精的主要成分是呈味核苷酸二钠和*钠，其鲜味与呈味核苷酸二钠和*钠的用量比例有关。因此呈味核苷酸二钠含量测定是评价鸡精质量的重要指标。常用的呈味核苷酸二钠测定法为紫外分光光度法和色谱法。其中，高效液相色谱法可以有效避免其他成分的干扰，是一种比较理想的检测方法。

　　1.样品处理

　　称取1g(精确至0.01g)样品于具塞塑料离心管中，加水超声提取10min定容至100ml容量瓶中，然后以9000rpm离心10min，取上清液1ml过微孔滤膜(0.45pm)。

　　2.配置标准溶液

　　标准储备液(1000mg/l)称取100mg(精确到0.1mg)的鸟苷酸二钠(GMP)和*酸二钠(IMP)标准品，用水溶解并定容于100ml容量瓶中。

　　3.色谱参数

　　色谱柱：AgilentCis不锈钢柱(150mmx3.0mm(i.d.)，5hcm)；

　　流动相：5:95(甲醇：乙酸铵溶液(pH=6.6))；

　　流速：0.4ml/min；

　　进样量：5v；

　　柱温：30℃；

　　检测波长：254nm。

　　4.标准曲线

　　配制浓度分别为1、3、5、10、30、50、100μg/ml的GMP、IMP混合标准工作液，浓度由低到高检测，以浓度-峰面积作图，得到标准曲线回归方程。计算GMP、IMP的相关系数，检验响应值是否在标准曲线范围内。

　　5.回收率

　　对样品进行多次平行测定，计算回收率。

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