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高效液相色谱柱的使用技巧

2020年06月19日 13:47人气：1078

　　色谱柱是高效液相色谱仪的核心部位，负责样品的分离。色谱柱的性能对高效液相色谱的性能有着直接影响，因此，在使用高效液相色谱法进行分析时不仅要选择合适的色谱柱，还需要注意色谱柱的使用方法。下面就简单介绍一下色谱柱的使用技巧。

　　1.色谱柱柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配

　　色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多，如果接头和柱头深度不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。

　　2.溶剂的匹配转换

　　色谐柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，造成柱头堵塞。建议仪器和色谐柱经常使用，用10%的有机溶剂保持即可。

　　3.流动相及待测样品的过滤

　　日常分析工作中，我们使用的流动相和待测样品应用0. 45μum滤膜过滤后再连接或注入到色谱仪上。

　　4.色谱柱分析时应进行平衡和老化

　　对某些特定的待测物，如分子量大于1000的，因扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。

　　5.pH使用范围

　　一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2 -8，如果选用的是高品质硅胶，加上高密度键合和双封尾，使pH耐受范围可以提高到10。

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