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分光光度计定量检测核酸的使用技巧

2020年06月02日 11:43人气：744

　　【仪器网使用手册】核酸定量检测是分光光度计在现代分子生物实验种使用频率较高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA以及RNA。进行核酸定量时有一些使用技巧可以帮助操作者更好地完成检测。

　　1.每种核酸的分子构成不一，因此定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。测试后的吸光值需要经过对应系数的换算，才能得出相应的样品浓度。

　　2.灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。不过分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，只要多次测试的结果均值变动范围在准确度范围内就是正常的。

　　3.核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值、离子浓度等也会导致读数漂移。因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。

　　4.样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值需要在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。这意味着样品的浓度不能过低，或者过高(超过光度计的测试范围)。

　　5.混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值。

　　6.混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈。

　　7.须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大。

　　8.不能采用窗口磨损的比色杯。

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