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关于大鼠ELISA试剂盒HIV测定过程
1 配液：ELISA试剂盒将50ml浓缩洗刷液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。
2 编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照3孔、阳性对照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔，空白对照1孔。
3 加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育30min。
4 洗刷：当心把封板膜揭去，用洗板机挑选5次程序，洗板后拍干。
5 加酶：每孔加酶结合物100μl(空白对照孔除外)，充沛混匀，用封板膜封板后置37℃温育30min。
6 洗刷：当心把封板膜揭去，用洗板机挑选5次程序，洗板后拍干。
7 显色：每孔加入显色剂A液和B液各50μl，悄悄振动混匀，封板后置37℃避光显色15min。
8 测定：每孔加终止液50μl，悄悄振动混匀。设定酶标仪波长为450nm(建议使用双波长的酶标仪比色，参阅波长630 nm)，空白调零，读取各孔OD值。
9 判断成果：核算临界值(cut-off)(CO)值。 临界值=阴性对照A均值+0.12 正常情况下，阴性对照孔的OD值≤0.10(若1孔阴性对照的OD值>0.1应放弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值>0.1，应重复实验。)。样品OD值<临界值者为HIV抗体阴性。
正常情况下，阳性对照孔的OD值≥0.80(若1孔阳性对照的OD值<0.8应放弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值<0.8，应重复实验。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。
ELISA试剂盒注意：关于筛查阳性标本，应从头取样双孔复试，复试阳性者应按照《全国*管理规范》送HIV确证实验室进行确证实验。 质量操控： 每块板设阴阳性及空白对照，并于每次实验用克己质控血清作质控，将质控血清孔OD值采用“即刻法"核算或标在质控图上，如质控有效，标明实验牢靠；如失控，则要查看试剂效期、贮藏温度、试 验温度是否正常、操作过程是否正确，直至从头实验使其在控。
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