分子荧光光谱仪的分析方法
分析方法
(1)定性方法:
不同分子结构的各种荧光物质,具有不同的激发光谱(吸收光谱)和荧光光谱,这是分子荧光分析的定性依据。
在一定实验条件下,用荧光分光光度计作试样和标样的激发光谱和荧光光谱,然后比较它们的光谱图,即可鉴定试样物质。
(2)定量方法:
1.工作曲线法
先配一系列不同浓度的标准溶液并分别测定其荧光值,然后将减去试剂空白荧光值的标准溶液荧光值与其相应浓度作图,即其工作曲线。
根据试液及试液空白荧光值,在此曲线上即可找到试液的浓度。同时根据工作曲线的线性情况,可确定试液的浓度范围上限。
2.直接比较法
试样和标样溶液的浓度比=(试样荧光值-试样本底荧光值)/(标样荧光值-标样本底荧光值)
直接比较法简单快速,它要求被测样品 浓度与其相应的荧光值必须处于线性范围内。
3.内标法
试样和标样溶液的浓度比=(试样荧光值-试样本底荧光值)/(试样加标样的混合溶液荧光值-试样荧光值)
用内标法时,由于试样和标样的荧光值 是在相同体系中测定的 ,因此可消除试样中 某些杂质荧光的干扰 。
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