薄层色谱的操作方法简介

　　【仪器网 使用手册】薄层色谱扫描仪是可以对斑点进行扫描的分光光度计，通常用可见光或紫外光作光源，线性扫描或锯齿扫描薄层板展开后的斑点，该斑点就吸收该组分特征波长的单色光，剩余的单色光经透射或反射或发射荧光，由检测器积分起来获得这块斑点面积的待测物质含量。仪器适用于化工、医药、临床、农业、食品、毒理等领域的各种化合物的分离、精制、定性鉴别、杂质检查和含量测定。
 

　　操作方法：
 

　　1、薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～0.3mm)取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。
 

　　2、点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况应以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
 

　　3、展开展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5-1.0cm密封缸盖，待展开至规定距离取出薄层板，晾干后按各品种项下的规定检测。
 

　　4、如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除规定外可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，
 

　　结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得准确的结果。