菌种活化培养基的配置

1）菌种试管斜面（活化）培养基及母种扩大培养基
马铃薯琼脂糖培养基：马铃薯（去皮）200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15～20g、蒸馏水1000 ml ， pH自然。试验用量为1/5。
① 称量 取去皮马铃薯40g，葡萄糖两份，每份2g，琼脂1.5-2.0g。琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量差的应适当增加。
② 将马铃薯切成小块，放入锅中，加水200mL，煮沸30 min。用双层纱布滤去马铃薯残渣，滤液加蒸馏水定容到200mL，搅拌均匀。
③ 取100mL滤液，装入250mL的锥形瓶内，加入2g葡萄糖，搅拌使糖溶解，然后加塞包扎，等待灭菌。该培养基即为酵母菌扩大培养的液体PDA培养基。

④ 将剩余100mL马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。在琼脂熔化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

⑤ 加入2g葡萄糖，葡萄糖溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容到100mL。

⑥ 分装 将煮好的培养基分装于试管中，其量为管高的1／5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。
⑦ 加塞 在管口塞上棉塞。棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。
⑧ 包扎 加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称。
⑨ 灭菌 将上述培养基以0.1MPa，121℃，高压蒸汽灭菌20 min。

⑩ 搁置斜面 将灭菌的试管培养基竖直放置，冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

2）进行恒温摇床培养的PDA液体培养基

① 称量 取去皮马铃薯180g，分别称取葡萄糖1g、2g、3g各三份。

② 将马铃薯切成小块，放入锅中，加水900mL，煮沸30 min。用双层纱布滤去马铃薯残渣，滤液加蒸馏水定容到900mL，搅拌均匀。
③ 分装 将煮好的培养基分装于9个锥形瓶中，每支锥形瓶100mL培养基，编号（1）-（9），用记号笔注明置于恒温摇床。
④ 加葡萄糖，利用1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L的盐酸溶液按照下表调节pH ，并向对应PDA液体培养基（每瓶100mL）中加入相应量的葡萄糖 。
⑤ 加塞 搅拌充分后，在瓶口塞上棉塞。棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。
⑧ 包扎 加塞后，再在棉塞外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。
⑨ 灭菌 将上述培养基以0.1MPa，121℃，高压蒸汽灭菌20 min，冷却待用。