浙江苏净——生物安全柜的试验方法

　　生物洁净安全柜是当今微生物实验室之必要品，特别是那些对操作者需要采取保护措施的场合。如医疗、制药、科研等进行细菌培养时提供既无菌无尘又工作安全的环境。为了让更多用户更加充分的了解该产品，接下来浙江苏净为您解析生物安全柜的试验方法。

　　1、一般要求

　　1.1 试验条件

　　“被测生物安全柜置于正常工作条件下”指：生物安全柜工作于说明书所规定的条件下。

　　1.2 试验顺序

　　应按本标准6.3条规定的顺序进行试验。

　　1.3 试验环境

　　生物安全柜的性能试验应在符合下列环境要求的门口带正压缓冲室的实验室内进行:

　　a) 温度： 15~30 ℃;

　　b) 相对湿度：不高于70 %;

　　c) 洁净度：在自净状态下可以达到5级。

　　1.4供电电源

　　1.4.1 电源电压偏差：±3V;

　　1.4.2 电源频率偏差：±2Hz。

　　2、试验仪器

　　2.1 试验仪器应定期送至具有检定(检验、校准)资格的计量测试机构进行测试，有效使用周期zui长不得超过一年。试验仪器检定并校正合格后才可投入使用。

　　2.2 生物安全柜的试验需要以下仪器：

　　a)气溶胶发生器

　　b) 粒子计数器(粒径分辨率由0.3μm或0.1μm起始);

　　c) 喷雾效率≥88 %的喷雾器，符合本标准附录A的要求;

　　d) 外径为63mm的两端闭合的模拟干扰圆筒(简称圆筒)，长度由生物安全柜的内部尺寸决定，材质为不锈钢或铝;

　　f) 撞击采样器(毛细管直径为1.0mm，采样量为12.5l/min);

　　g) 缝隙采样器(采样量为30l/min);

　　f) Φ90培养皿，培养基中应含有营养琼脂、大豆琼脂或其他适合微生物生长的不含抑制剂或添加剂的介质;

　　g) 热球式风速仪或风量测试仪，测量精度为±0.01m/s;

　　h) 微压计，精度等级不低于1.5级;

　　i) 干球温度计，zui小单位分格为1℃;

　　j) 声级计，测量范围为50~100dB，“A”计权模式;

　　k) 照度计，能满足1000lx以下照度的测量;

　　l) 振动仪，zui小灵敏度达到2.5μm振幅有效值;

　　m) 接触电流检测仪;

　　n) 微电阻测试仪;

　　o) 耐压测试仪，输出交流有效值1500V，或直流2121V电压，且持续时间能在1~60s范围内设定。

　　3、试验方法

　　3.1箱体检漏

　　卸去被测生物安全柜的部分护板或装饰板，暴露箱体，并将生物安全柜箱体形成一个独立闭合系统。

　　将箱体加压至500Pa，连续维持该状态。在箱体的焊缝、垫片、贯穿部分及密封处喷涂25g/L肥皂液，以找出泄漏点。

　　备注：可用中性洗涤剂稀释10倍当肥皂液使用。

　　3.2 过滤器检漏

　　3.2.1 排风过滤器检漏

　　排风过滤器检漏在下述方法中任选一种：

　　a) 只开排风机，不开送风机，使生物安全柜吸入普通环境空气，含尘浓度不低于10000粒/L(≥0.5μm)。用粒子计数器的采样口在排风过滤器出风面和边框缝隙处之上20mm处，做扫描检漏，扫描移动速度≤5~20mm/s，路线应重叠。

　　b) 通过气溶胶发生器在排风过滤器的上游，通过有螺纹插塞的贯穿物向被测生物安全柜的远离过滤器的静压箱内导入气溶胶，并在上游临近过滤器处测量气溶胶浓度，测点zui少为3点，分别为中心1点，距两边50mm处各一点。用粒子计数器的采样口在排风过滤器出风面之上20mm处，做扫描检漏，扫描移动速度≤5~20mm/s，路线应重叠。

　　如果检漏标准是以0.1μm来评价，只适用方法b)。

　　检测到的粒子数应符合表4中第2项的规定。

　　3.2.2 送风过滤器检漏

　　环境含尘浓度≥10000粒/L(≥0.5μm)，在送风面以下20mm处，作扫描检漏，扫描移动速度≤5~20mm/s，路线应重叠。

　　检测到的粒子数应符合表4中第2项的规定。

　　3.3洁净度

　　被测生物安全柜置于正常工作条件下运行30min。

　　洁净度的测量边界距离内表面或前窗150mm。

　　粒子计数器的采样口置于工作台面向上200mm高度位置，测量点按图1布置。

　　洁净度应符合表4中第3项的规定。

　　3.4人员安全性

　　3.4.1仪器及采样点布置(图2)：

　　a) 把含有55ml枯草芽孢菌悬液(5 ~ 8×108/ml)的喷雾器置于安全柜左右内壁的水平中心，其水平喷射轴应在工作台面向上350mm处，且平行于工作面。喷雾器的喷嘴应置于距前窗内侧100mm处并朝向前窗。

　　b) 圆筒置于安全柜*，且中心轴位于工作台面向上70mm处。圆筒的一端紧靠安全柜的后壁，另一端应伸出安全柜前窗至少150mm。

　　c) 圆筒周围设四个撞击采样器，它们的采样口设置在安全柜前窗向外63mm处。其中两个撞击采样器的采样口的轴心线相隔150mm，且与圆筒顶部水平线相切。另两个撞击采样器的采样口的轴心线相隔50mm，且与圆筒底部水平线在一个水平面上。另设置两个撞击采样器，其采样口所在的水平面位于工作台面向上360mm处，两个采样口的竖轴在安全柜前窗向外50mm处，并分别位于安全柜中心线两边各150mm处。

　　d) 设置两个缝隙采样器，其采样口所在的水平面即为工作面，垂直轴线距安全柜前端外壁面150mm，且距两边内壁面均为200mm处。

　　e) 作为阳性对照，一个有支撑架的琼脂培养皿放在圆筒中心轴下方，且位于前窗进风隔栅上方或下方10mm，使其对进入隔栅的气流干扰zui小。

　　3.4.2 采样程序

　　缓冲室正常运行，自净系统开启，直至环境洁净度达到5级后，停止自净系统，生物安全柜运行30min后开始试验。

　　试验的持续时间为30min，采样程序见表5：

　　表5　　采样程序

　　3.4.3细菌培养

　　采用一个直径为47mm，孔径为0.22μm的薄膜滤片过滤所有的撞击采样器采样液体。在无菌状态下，卸下滤片并置于有合适介质的培养皿中。盛有滤片的培养皿、两个缝隙采样器的培养皿和对照培养皿在37℃下培养24~28h后检测。若培养皿为阴性，则重新培养，并在44~48h后读数。

　　对照培养皿应是阳性。当对照培养皿内含有≥300个枯草杆菌的菌落，称其为阳性。

　　应按6.3.4.2和6.3.4.3的程序进行三次试验。

　　6.3.4.4 对于新产品或经过重大改型设计的生物安全柜在下述条件下按6.3.4.2和6.3.4.3的程序分别重复进行试验：

　　a) 吸入口风速偏离标准风速–0.05±0.015m/s，送风风速偏离标准风速+0.05±0.015m/s;

　　b) 吸入口风速偏离标准风速–0.05±0.01m/s，送风风速偏离标准风速–0.05±0.01m/s。

　　3.4.5 试验结束后对环境内的各个表面进行擦拭消毒。

　　3.5 受试样本安全性

　　3.5.1仪器及采样点布置(图3，图4)：

　　a) 含有55ml芽孢菌悬液(5 ~ 8×106/ml)的喷雾器置于安全柜的水平中心，其水平喷射轴应在工作台面向上200mm处，且平行于工作面。喷雾器的喷嘴应置于距前窗外侧100mm处，并朝向前窗。

　　b) 圆筒置于安全柜*，且中心轴位于工作台面向上70mm处。圆筒的一端紧靠安全柜的后壁，另一端应伸出安全柜前窗至少150mm。

　　c)在工作台面上满布琼脂培养皿，然后依次打开培养皿盖子。

　　d) 作为阳性对照，一个有支撑架的琼脂培养皿放在圆筒中心轴下方，且位于前窗进风隔栅上方或下方10mm，使其对进入隔栅的气流干扰zui小。

　　3.5.2 采样程序

　　缓冲室正常运行，自净系统开启，直至环境洁净度达到5级后，停止自净系统，生物安全柜运行30min后开始试验。

　　喷雾器运行5分钟。喷雾器停止5分钟后，为琼脂培养皿上盖。

　　3.5.3细菌培养

　　培养皿在37℃下培养24~28h后检测。若培养皿为阴性，则重新培养，并在44~48h后读数。

　　对照培养皿在37℃下培养24~28h后检测应是阳性。当对照培养皿内含有≥300个枯草杆菌的菌落，称其为阳性。

　　应按6.3.5.2和6.3.5.3的程序进行三次试验。

　　3.5.4对于新产品或经过重大改型设计的生物安全柜在下述条件下按6.3.5.2和6.3.5.3的程序分别重复进行试验：

　　a) 吸入口风速偏离标准风速–0.05±0.015m/s，送风风速偏离标准风速+0.05±0.015m/s;

　　b) 吸入口风速偏离标准风速–0.05±0.01m/s，送风风速偏离标准风速–0.05±0.01m/s。

　　3.5.5 试验结束后对环境内各个表面进行擦拭消毒。

　　3.6 交叉感染

　　3.6.1仪器及采样点布置(图5)：

　　a) 含有55ml枯草芽孢菌悬液(5 ~ 8×104/ml)的喷雾器，其水平喷射轴位于工作台面向上76~127mm处，且平行于工作面。喷雾器的背面紧靠左(右)内壁的气流分界面，喷嘴正对右(左)内壁。

　　b) 琼脂培养皿按以下方法布置：

　　位于喷雾器喷嘴的下方设置两个对照培养皿，距右(左)内壁360mm处布置一列培养皿，在紧靠上述培养皿右(左)侧再布置一列到两列培养皿。

　　3.6.2 采样程序

　　缓冲室正常运行，自净系统开启，直至环境洁净度达到5级后，停止自净系统，生物安全柜运行30min后开始试验。

　　喷雾器运行5分钟。喷雾器停止15分钟后，为琼脂培养皿上盖。

　　3.6.3细菌培养

　　培养皿在37℃下培养24~28h后检测。若培养皿为阴性，则重新培养，并在44~48h后读数。

　　对照培养皿在37℃下培养24~28h后检测应是阳性。当对照培养皿内含有≥300个枯草杆菌的菌落，称其为阳性。

　　应按3.6.2和3.6.3的程序进行三次试验。

　　3.6.4对于新产品或经过重大改型设计的生物安全柜在下述条件下按6.3.6.2和6.3.6.3的程序分别重复进行试验：

　　a) 吸入口风速偏离标准风速–0.05±0.015m/s，送风风速偏离标准风速+0.05±0.015m/s;

　　b) 离标准风速–0.05±0.01m/s，送风风速偏离标准风速–0.05±0.01m/s。

　　3.6.5 试验结束后对环境内各个表面进行擦拭消毒。

　　3.7 送风风速

　　在距离内侧壁板及前窗100mm围成的，在工作台面上方300mm处的平面区域内测量垂直气流的平均风速。

　　测量点服从行、列均为150m m的网格分布。若去除测量边界后净尺寸不等于15的整数倍，则允许修正测量点距离，但每列至少测量3点，每行至少测量7点。

　　送风风速为各测量点读数的算术平均值。

　　送风风速应符合表4中第7项的规定。

　　3.8 工作窗口进风风速

　　3.8.1 对I级和*进行工作窗口进风风速试验。试验步骤如下：

　　a) 对试验环境停止送风。

　　b) 测量排风口速度

　　用套管和排风口法兰连接，套管长度等于排风口长边的2倍。将套管截面均分为约100mm×100mm的方块，每一块中心为一个测点，测点总数不少于6个。在套管中部垂直两边正对每一列方块中心打孔，风速仪测杆伸入孔中测量。

　　c) 求出排风量

　　以套管截面平均风速乘以套管截面积即得排风量(m3/s)。

　　d) 测量送风面速度

　　在送风散流板垂直向下150mm，距边墙50mm围成的平面区域内测量送风风速。该平面的测量点服从行、列约为100mm的网格分布。测点总数不少于6个。

　　e) 求出送风量

　　以送风面平均风速乘以送风面面积即得送风量(m3/s)。

　　f) 排风量(m3/s)与送风量(m3/s)的差值即为计算得到的工作窗口进风风量(m3/s)。

　　g) 计算得到的工作窗口进风风量(m3/s)与前窗开口面面积(m2)的商，即为工作窗口进风风速(m/s)，该数值应符合表4中第8项的规定。

　　3.8.2 Ⅲ级生物安全柜手套入口的风速测定，试验步骤如下：

　　开启生物安全柜。把风速仪放在手套入口的中心处，并记录测量的风速，测量时间zui少为1分钟。另一只手套入口的中心处用风速仪进行重复测量。

　　3.9 压差

　　被测生物安全柜置于正常工作条件下，柜上微压差计或用规定微压差计测出柜内外压差。

　　3.10温升

　　被测生物安全柜置于正常工作条件下连续运行4h。

　　将一个干球温度计置于被测生物安全柜前窗开口面中心向外80mm处测量环境温度，另一个干球温度计置于被测生物安全柜工作台面的几何中心向上300mm处测量操作区温度。

　　当温度计上的数值达到稳态后，两个温度计的差值应符合表4中第10项的规定。

　　3.11 噪声

　　对试验环境停止送风。

　　声级计置于“A”计权模式。

　　在被测生物安全柜前壁面中心水平向外300mm，高度距地面1100mm处测量。

　　噪声读数按表6修正。

　　表6 噪声读数修正

　　处理得到的数值应符合表4中第11项的要求。

　　3.12 照度

　　在工作台面上，沿工作台面内壁面水平中心线每隔300mm设置一个测量点。与边墙距离<150mm时，不再设置。

　　被测生物安全柜置于正常工作条件下，重复各测量点检测。被测生物安全柜照度为各测量点照度的算术平均值，并应符合表4中第12项的要求。

　　3.13 振动幅值

　　被测生物安全柜置于正常工作条件。

　　将振动仪的振动传感器牢固地固定在工作台面的中心，测量生物安全柜工作时的总振幅。

　　工作台面的振动幅值应符合表4中第13项的规定。

　　3.14 工作台面抗变形

　　将面积为250mm×250mm、重量为23kg的测试负载均匀地施加于被测生物安全柜台面*，在载重条件下测量安全柜台面前部边缘中心至地面的距离。

　　负载及空载条件下安全柜台面前部边缘中心至地板的变化距离应小于5mm。

　　3.15 接触电流

　　按GB/T12113 接触电流和保护导体电流的测量方法进行试验，试验结果应符合表4

　　中第15项的规定。

　　3.16 接地电阻

　　被测生物安全柜所有的功能开关均置于“断”位，用微电阻测试仪测量电源插头“地”插销与可触及件之间的电阻，电阻值应符合表4中第16项的规定。

　　3.17 耐电压

　　被测生物安全柜电源输入端各极插销与箱体接地端之间应能承受50Hz正弦电压1500V有效值工频电压持续1min，应无击穿和闪络现象。

　　3.18气流流向

　　3.18.1 工作区内气流

　　在Ⅰ级、*的工作区域离开口处约50mm的整个截面上发可视性烟雾，观察烟雾，应符合表4中第18项规定。

　　3.18.2 吸入口气流

　　在*外离开口处约100mm的整个截面上发可视性烟雾，观察烟雾，应符合表4中第18项规定。

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