K1-Fluo 激光共聚焦显微镜在细胞骨架研究中的应用

随着生物学的发展，对观察细胞形态所使用的仪器精度也越来越高，激光共聚焦显微镜具有高灵敏度，高分辨率，高放大率等优点，而且它不但可以在水平方向上对标本进行测量和分析，还可以获得清晰的三维图像。同时它还可以处理活的样品，不会对样品造成化学或物理破坏，因此它在形态学，分子细胞生物学，神经科学，药理学，遗传学等研究领域中成为有力的工具。

K1-Fluo 激光共聚焦显微镜的介绍

共聚焦显微镜的原理

K1-Fluo ABM 是在荧光显微镜的基础上加装了激光扫描装置，使用405nm ,488nm , 561nm , 638nm波长的激光作为光源，并利用计算机进行图像处理，获得高分辨率，高质量的图像。K1-Fluo ABM 主要由激光发射器，扫描器，荧光显微镜，计算机存储器以及处理和控制系统组成。通过针孔成像技术还可以对样品进行无损伤断层扫描，并且利用自带的软件自动进行三维重构。

由于K1-Fluo 采用针孔共聚焦技术，在物镜的焦平面上放置了一个带有小孔的挡板，可以将焦平面以外的杂散光挡住，消除球差，并进一步消除色差。

传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射的干扰，激光共聚焦显微镜采用点扫描技术，激光束经照明针孔形成点光源对焦平面上进行逐点扫描，标本上被照射的荧光在探测针孔处成像，该点以外的荧光均被探测针孔挡住，因此大大提高了清晰度。在物镜转台上装上步进马达，就可以控制物镜上下移动，就可以获得一张纸连续的光学切片，在利用计算机系统自动进行三维重建。

与此同时LSCM也是观察活细胞动态、多重免疫荧光标记和离子荧光标记的有力工具。

K1-FluoDMB激光共聚焦显微镜的应用案例

微丝（MF），又称肌动蛋白，是真核细胞中由肌动蛋白组成的高度动态的网络结构，其参与细胞内多种生理活动，如细胞质流动、细胞分裂、细胞颗粒的运输、肌肉收缩等等。细胞骨架通常是通过迅速的聚合解聚来调整或改变其形态，从而在细胞中开展各种功能以及应对外界刺激时维持细胞正常的生理活动。细胞中微丝骨架的动态变化直接接受肌动蛋白结合蛋白（ABPs）的调节。ABPs通过与单体肌动蛋白或丝状肌动蛋白结合，调节二者之间的动态平衡，进而调控微丝骨架的组织和功能。通过采用探针标记对体内的微丝骨架进行标记再利用激光共聚焦显微镜进行激发荧光可以获得可视化的图像。正是由于发光探针结合激光共聚焦显微镜的使用，才使得对于细胞骨架的系统性研究越来越透彻，从而一步步揭开细胞骨架的奥秘。

1.细胞观察

结论：

通过多篇文献的反映，激光荧光共聚焦显微镜呈现一系列的优点，比如：高清晰，高分辨率图像的采集，无损伤连续光学切片的采集，三维图像的重建，对感兴趣区域的扫描，定位，测量等。

通过激光共聚焦显微镜可以获得丰富的实验数据，有利于支持实验研究，而K1-Fluo自带的分析软件还可以对样品进行最直观的分析。

总而言之，我们相信，LSCM 可以开拓生命科学实时观察活细胞的机构和离子动态生物学变化的途径，随着新软件的不断开发以及各个学科的不断发展和渗透，为了CLSM 必将由更广阔的发展前景。