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流式细胞仪的使用注意事项

2022年07月14日 13:36人气：1357

　　流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把想要的细胞亚群从中分选出来。

　　流式细胞仪主要由流动室和液流系统、激光源和光学系统、光电管和检测系统、计算机和分析系统四个部分组成，要想很好地应用流式细胞分析和分选技术，必需先对仪器进行调试，使其处于良好的工作状态，并能正确使用仪器。下面简要介绍流式细胞仪的调试项目及要点、使用的程序等等。

　　调试和校准

　　1、激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。

　　2、液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节　气体压力大小以获得稳定的液流速度。

　　3、测量区光路调节　：这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交，而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。

　　仪器的操作和使用

　　1、打开电源，对系统进行预热；

　　2、打开气体阈，调节　压力，获得适宜的液流速度；开启光源冷却系统；

　　3、在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统；

　　4、利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0和90散射的荧光强度*，并要求变异系数为最小；

　　5、选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品；同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程；

　　6、样品测量完毕后，再用去离子水冲洗液流系统；

　　7、因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统，存贮量更大)，因此可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理；

　　8、将所需结果打印出来。

　　操作和使用中的注意事项

　　1、光电倍增管要求稳定的工作条件，暴露的较强的光线下以后，需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作；另外还要注意磁屏蔽；

　　2、光源不得在短时间内(一般要1h左右)关上又打开；使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常；

　　3、液流系统必需随时保持液流畅通，避免气泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒；

　　4、注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等；

　　5、特别强调每次测量都需要对照组。

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