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革兰氏染色法的原理和实验步骤

2021年12月18日 15:53人气:3489

  革兰氏染色法指的是细菌学中被广泛用来鉴别细菌的一种方法。最初是一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰用来鉴别肺炎球菌和克雷白氏肺炎菌,在后续不断推广下,现在成为了鉴别细菌种类的重要特性之一。通过观察染色后的细菌,根据染色后细菌呈现的颜色可以分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌,阳性细菌呈紫色,阴性细菌呈红色,并且还能够清楚地观察到细菌的的形态、排列组合以及某些结构特征的不同,通过这些特性再进行分类鉴定。
 
  革兰氏染色法的染色原理是由于阳性细菌和阴性细菌的细胞壁组成结构和成分上有所差异,染色体的反应也不同,阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚,其肽聚糖网状结构之间交联紧密,经过乙醇脱色处理后会发生脱水情况,导致阳性菌的孔径缩小,使得通透性能降低,结晶紫与碘形成的大分子复合物就会保留在细胞壁内不脱色,细胞最终呈现紫色;阴性菌的肽聚糖层比较薄,网状结构之间的交联松散,且脂类含量高,经过乙醇脱色处理后,乙醇将类脂溶解,细胞壁的孔径变大,通透性增强,细胞壁上会出现较大的缝隙,使结晶紫与碘的复合物容易溶出细胞壁,导致细胞脱色,细胞呈无色状态,这时再用红色染料对细胞进行复染,革兰氏阴性细菌最终呈红色状态。
 
  革兰氏染色的实验步骤
 
  1.制片:选取菌种培养物中常规涂片,干燥后再进行固定,步骤与简单染色法相同;
 
  2.初染:滴加草酸铵结晶紫,染色1-2min后进行水洗;
 
  3.媒染:用碘液去除残留的水分,并用碘液覆盖约1min后再进行水洗;
 
  4.脱色:用滤纸将残水吸去,滴加95%的酒精,大约25-30s,直到乙醇不再流出紫色时,立刻进行水洗;
 
  5.复染:用番红液复染1-2min,再次水洗;
 
  6.镜检:标本片干燥后,用油镜进行观察,菌体被染成红色的即为革兰氏阴性菌,被染成紫色的即为革兰氏阳性菌。
 
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