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超微量分光光度计的结构特点和应用

2021年03月17日 16:41人气:2516

  【仪器网 行业应用】超微量分光光度计是一类很重要的分析仪器,在物理化学、生物医学、材料学、环境科学、化工冶金等生产管理部门都有广泛而且重要的应用。超微量分光光度计已成为现代分子生物实验室常规仪器,常用于核酸、蛋白定量及细菌生长浓度等的定量。
 
  仪器结构:
 
  1、光源(钨灯、卤钨灯,氢弧灯,氘灯、氙灯或激光光源)。
 
  2、单色器(滤光片、棱镜、光栅、全息栅)。
 
  3、样品吸收池。
 
  4、检测系统(光电池、光电管、光电倍增管)。
 
  5、信号指示系统(检流计、微安表、数字电压表、示波器、微处理机显像管),光源-单色器-样品吸收池-检测系统-信号指示系统。
 
  性能特点:
 
  1、所需样品体积小,仅需1~2μL。
 
  2、不需要比色皿,用移液枪将样品滴加到检测平台上,测量时自动形成液柱。
 
  3、检测完成后只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可。
 
  4、有1mm和0.2mm两个光程(电机控制自动选择光程),样品无需稀释,测量范围可达常规分光光度计的50倍。
 
  5、氙气闪光灯为灯源,寿命长,性能稳定
 
  6、不需要预热,可随时检测
 
  7、显示吸光度值的同时,程序直接给出浓度值(核酸、蛋白和荧光染料)
 
  8、体积较小,携带方便。
 
  应用领域:
 
  1、核酸的定量
 
  核酸的定量是超微量分光光度计使用频率较高的功能。其可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的z高吸收峰的吸收波长为260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。
 
  2、UV-VIS常规可见-紫外检测
 
  全波长超微量分光光度计可以像普通的紫外-可见分光光度计一样行使功能。
 
  3、蛋白质的直接定量(UV法)
 
  这种方法是在280nm波长直接测试蛋白。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。
 
  4、比色法蛋白质定量
 
  蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸如*、*等与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
 
  5、细菌细胞密度测定
 
  实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。
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