鸡肿瘤坏死因子β（TNF-β）ELISA检测试剂盒

上海古朵生物详细讲述鸡肿瘤坏死因子β（TNF-β）ELISA检测试剂盒组成，操作步骤及其他咨讯，本司提供ELISA试剂盒免费代测服务，一周内出结果，ELISA种属有：大鼠ELISA检测试剂盒，小鼠ELISA检测试剂盒，人ELISA试剂盒，马ELISA检测试剂盒，羊ELISA检测试剂盒，猴ELISA试剂盒，猪ELISA试剂盒，狗ELISA检测试剂盒，

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鸡肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA检测试剂盒说明书

　　【信息说明】

　　中文名：鸡肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

　　别名：鸡肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA Kit

　　供应商：上海古朵

　　规格：48t/96t

　　保存：2-8℃

　　保质期：6个月

　　用途：主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。

　　试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。

　　种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、植物等。

　　【组成说明】

　　1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

　　2、单道或多道微量加液器及吸头

　　3、稀释样品的EP管

　　4、蒸馏水或去离子水

　　5、吸水纸

　　6、盛放洗液的容器

　　【样本要求】

　　1、血清：

　　室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　2、血浆：

　　应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

　　3、尿液：

　　用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

　　4、细胞培养上清：

　　检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

　　5、培养细胞:

　　检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　6、组织标本:

　　切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　7、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　8、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　【操作步骤】

　　1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。

　　2、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4、配液：将30倍(48T 的20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、温育：操作同3。

　　8、洗涤：操作同5。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　【注意事项】

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。

　　4、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物请避光保存。

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9、本试剂不同批号组分不得混用。

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