M036 *12测定培养基

*12测定培养基，不含*12，但包含所有其他维生素和必要养分，用于莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）的生长。莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，zui早由Capp等人描述（1）并被美国药典和美国分析化学家协（AOAC）所*（2，3）。

*12测定培养基原理

乳酸杆菌生长需要特别的营养，因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基：即维持培养基，用于保持菌种活力；接种培养基，用于测试菌液的制备；测定用培养基，用于待测维生素的定量。

*12测定用培养基，不含*12，但包含所有其他维生素和必要养分，用于莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）的生长。莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，zui早由Capp等人描述（1）并被美国药典和美国分析化学家协（AOAC）所*（2，3）。

用已知稀释度的*12标准品，可以制备标准曲线（2，3）。

测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中，*在37°C 孵育24 小时，再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中，再通过浊度分析或酸度分析，确定生长反应。

  用*12的浓度及对应的吸光度制作标准曲线。用标准曲线可确定待测样本中的*12的浓度。

应非常小心地避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。

用于接种的测定菌应在的培养基中培养。

*12测定培养基应用

*12测定用培养基*采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，进行*12的微生物法测定。

*12测定培养基培养基组分

成分                                     克/升

无维生素酸水解酪蛋白                 15.000

葡萄糖                               40.000

天*                           0.200

醋酸钠                               20.000

抗坏血酸                             4.000

L-*                             0.400

DL-*                            0.400

硫酸腺嘌呤                           0.020

*                               0.020

黄嘌呤                               0.020

核黄素（*2）                   0.001

盐酸硫胺素                           0.001

*                               0.00001

*                                 0.002

对氨基苯甲酸（PABA）                0.002

*                               0.001

盐酸吡哆醇                           0.004

盐酸吡哆醛                           0.004

*                           0.0008

*                                 0.0002

磷酸二氢钾                           1.000

*                           1.000

*                               0.400

氯化钠                               0.020

*                             0.020

硫酸锰                               0.020

聚山梨酯80                           2.000

盐酸*                           0.020

zui终pH值 (25°C)                     6.1±0.2

质量控制

Ø外观——奶油色至黄色，具均匀性，倾向形成可容易分解成粉末状的软块

Ø制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀

Ø配比浓度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.1±0.2

ØpH值——5.90-6.30

配置

称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，必要时加热使培养基*溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。测定时，分装试管，每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的*12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时，均可获得满意结果。

培养反应

进行微生物法测定*12。采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC 7830），35-37°C孵育18-24小时。

生长状况

随着测定管标准品水平升高，（美国药典*12标准水平，0，0.025,0.050，0.075,0.1,0.125,0.150,0.2ng)，目标菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。