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人总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒

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  【信息说明

  中文名:人总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒

  中文别名:人总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA Kit

  供应商:上海古朵

  规格:48t/96t

  保存:2~8℃

  有效期:6个月

  种属:人ELISA试剂盒

  适用范围:仅供科研

  保存及有效期:2-8℃,六个月,-20℃一年

  检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本;例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

 

  【特点说明

  专一性强:抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。

  灵敏度高:由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。

  样品易保存:经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定,因此有利于样品的保存。

 

  【组成说明

  1、已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)

  2、C的抗原或抗体(结合物)

  3、酶的底物

  4、阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中)

  5、结合物及标本的稀释液

  6、洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水

  7、酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L

  8、人总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒说明书

 

  【样本处理

  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

  1、血清:

  室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  2、血浆:

  应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  3、尿液:

  用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

  4、细胞培养上清:

  检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  5、组织标本:

  切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

 

  【操作步骤

  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,依次进行稀释数倍。

  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  配液:将30倍(48T 的20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  温育:操作同3。

  洗涤:操作同5。

  显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

  终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

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