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岛津学堂:一文读懂阿胶定量“新标准”

2020年04月08日 14:10:37来源:岛津

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  【仪器网 岛津导语:古语云“阿胶一碗,芝麻一盏,白米红馅蜜饯。粉腮似羞,杏花春雨带笑看。润了青春,保了天年,有了本钱”。阿胶能补血滋阴、润燥止血,自古为滋补上品。
 
 
  阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶。近年来,随着驴皮货源紧缺,市面上存在不法商贩弄虚作假,以次充好,以牛皮、马皮等下脚料冒充驴皮制作假冒伪劣阿胶的行径,严重扰乱了阿胶市场。其他兽畜皮熬胶,也有补血止血的功能,但阿胶伪品的蛋白质成分及其含量和阿胶真品存在明显不同,与驴皮胶使用效果相差甚远。因此,掌握阿胶的真伪鉴别方法至关重要。
 
  为了进一步规范阿胶产业发展,提升阿胶品质保障能力,国家药典委在2019年发布关于“关于阿胶、海龙、海马等国家药品标准修订草案的公示”和“关于阿胶国家药品标准修订草案的公示(第二次)”两项公示稿,分别对阿胶【含量测定】和阿胶【鉴别】项下内容进行了修订。其中阿胶【含量测定】项修订幅度最大,新增了“特征多肽”含量要求:
 
  驴源多肽A1特征离子对:m/z469.25>712.30和m/z z469.25>783.40,
 
  驴源多肽A2特征离子对:m/z618.35> 779.40和m/z618.35> 850.40,
 
  按干燥品计算,“含特征多肽以驴源多肽A1(C41H68N12O13)和驴源多肽A2(C51H82N18O18)的总量计应不得少于0.17%”。
 
  此外,在2012年药典委颁布了《阿胶中牛皮源质量的补充检验方法》。2015版《中国药典》中,明确规定使用液相色谱-串联质谱法用于阿胶、龟甲胶、鹿角胶的鉴别。最近,国家药监局还颁布了《阿胶中猪皮源的补充检验方法》,在阿胶产品中应不得检出猪皮源(新阿胶)成分。
 
  岛津参考以上标准和文献报道,使用胰蛋白酶对阿胶、牛皮胶和猪皮胶等不同来源的明胶类物质进行酶切处理,通过岛津LCMS-8045液相色谱质谱联用仪(图1)对特征多肽进行测定,从而实现阿胶与杂皮胶的鉴别与阿胶的定量。
 
图 1 岛津 LCMS-8045液相色谱质谱联用仪
 
  主要方法参数
 
  色谱柱:
 
  Shim-pack GIST (2.1 mm I.D.×100 mm L., 2.0 μm)
 
  MRM参数:见表1
 
  表1 MRM优化参数
 
对照药材分析
 
  采用超高效液相色谱-质谱联用的方法,一次进样,同时分析8种特征多肽,实现阿胶药材的鉴别与定量。分析结果表明,阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2、黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源多肽信噪比均大于10:1,完全满足检测要求。如下图2(左右滑动查看全部内容)
 
图2 阿胶等8种特征肽定性色谱图
 
  样品测定
 
  对阿胶样品进行测定,黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源通道均未检出;阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2分离良好,峰形对称,且信噪比均大于10:1。如下图3(左右滑动查看全部内容)
 
图3   阿胶定性定量肽段测量
 
  总结
 
  阿胶作为滋补佳品,消费者平时关注更多的是阿胶的功效。其实,无数“实验猿”为了保证阿胶的真实与有效,默默地完成了大量阿胶药材真伪鉴别与含量测定的工作。有了本文的方法,“实验猿”可以一针进样鉴别多种肽段,节省时间。除此之外,本方法加入了定量肽段,可以实现定性定量同时分析。
 
  “暗服阿胶不肯道,却说生来为君容”。更多关于阿胶的文章,参阅岛津推出《胶类药材定性鉴别解决方案》。
(本文来源:岛津,转载请注明出处
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