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技术文章

革兰氏染色液使用说明

点击次数:209 发布时间:2014-11-14

 试剂组成:
结晶紫;碘液;95%酒精;蕃红。
保质期3-6个月,阴凉处保存。

   革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合,革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固,不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少,不牢固,易被酒精脱色。为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色。

操作步骤:
1、标本处理:
(1).有菌部位的标本,如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。
(2).无菌部位的标本,如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等,应取适量标本(zui高可达5-7ml),经3000rpm 离心10min.,取沉渣涂片染色。
2、涂片制作:菌液涂片时,用接种环沾取菌液点在载玻片上,标本可直接在玻片上涂布;菌落涂片时,先取生理盐水一滴,置玻片上,用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥,并经火焰固定,固定的温度不宜过高,以玻片背面接触手背不烫为准,否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。 3、染色方法:
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌。此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应。
(1).加上结晶紫后,染色1分钟,水洗。
(2).加上碘液后染色1分钟,水洗。
(3).加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒,水洗,吸去水分。
(4).加上蕃红后,染色1分钟,水洗。
(5).吸干或在空气中凉干后,油镜镜检。
4.结果观察:紫色为革兰氏阳性,红色为革兰氏阴性。
[注意事项]:
1.标本涂片不能太厚,严格按操作要求进行。
2.玻片通过火焰温度不能太高。
3.若涂片较厚,应延长脱色时间,直至不再出现紫色为止。
4.碘液变透明,则不能使用。
5. 水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。
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