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醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮为合成的孕激素类药物,有明显的孕激素和抗雄激素作用,可抑制排卵。孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用,动物实验表明有死胎率增加和致畸作用,副作用有:(1)恶心、头晕、倦怠;(2)突破性出血;(3)孕期服用,会增加女性后代的男性化作用。孕激素类药物能增强体内物质沉积和改善生产性能,可以很快产生显着和直接的经济效益,因此,对生产者有很大的吸引力。畜牧业中使用孕激素类药物(非治疗用途)已有很长的历史,但人类长期食用含有激素的肉制食品,即使含量甚微,亦会明显影响机体的激素平衡,而且有致癌危险,对幼儿造成发育异常等危害。因此,开发一种能检测孕酮残留量的方法是十分必要的。本文采用液相色谱法对牛和猪脂肪样品中的孕酮进行检测.
1 试剂与仪器
1.1 试剂 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品,乙腈,甲醇,乙酸乙酯,其他试剂为分析纯。水由净化系统制得。
(1)标准储备液:1000μg/ml,分别准确称取0.05g 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品于50ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。
(2)混合中间溶液I:100μg/ml,分别吸取10.0ml 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准储备液于100ml 容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。
(3)混合中间溶液II:1.0μg/ml,取1.00ml 混合中间溶液I于100ml 容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用半年。
(4)混合标准工作液:分别吸取10、20、40、80、100μl 混合中间溶液II 添加到980、970、950、910、890μl 的乙腈-水(65:35)中,再加入10μl 0.2%盐酸溶液,混匀,得到浓度为0.010μg/ml、0.020μg/ml、0.040μg/ml、0.080μg/ml 和0.10μg/ml 混合标准工作液,供液相色谱测定,当日使用。
1.2 仪器 LC7000 液相色谱系统,LC7011泵体,LC7020 紫外-可见检测器,Hanon-Clarity色谱软件。氮吹仪;海能全自动固相萃取装置;低温离心机;涡旋混匀器;CN 固相萃取柱。
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