北京北分兴宇仪器有限公司，【气相色谱仪】气相色谱法测定活络膏中*和*的含量

    活络膏是一种用于治疗活血化瘀、消肿止痛、舒筋活络、风除湿的中医方剂。 活血化瘀、消肿止痛、舒筋活络、风除湿。本膏药是根据济众堂古传医药验方，再经医学界精心研究组配而成，本品选用珍贵天然草药，功能开窍，兼具辛温驱风散寒之功，并配合多种中药材，以科学方法提取其中芳香性挥发物质，及其它非挥发性有效成份制成，故药力能迅速直透皮下组织，深入患处，促进血液循环，本膏疗效显著，确有药到病除之功能。

目的:建立活络膏中有效成分*和*的毛细管气相色谱测定方法。

方法:色谱条件以PEG-20M毛细管柱30 m×0.25 mm×0.25μm,程序升温,起始温度为80℃,保持5min后每分钟升高15℃,终止温度为190℃,保持8 min,分流比50∶1。

结果:各组分在相应的浓度呈良好线性关系,r1=0.999 79、r2=0.999 98,RSD≤2.0%。

结论:本方法简便、快速、准确,可用于活络膏的质量控制。

  北分兴宇仪器提供各类气相/液相色谱仪分析检测方案。有需要请与，：    活络膏是在已有的国家药品标准品种“*”的基础上,保持其原处方、制备工艺及给药途径不变,对其剂型进行进一步的研究试验改进而得,处方由*、樟脑、*和*等挥发性成分组成,具有舒筋活络、祛风散瘀作用。为了控制产品质量,对其中*和*两个组分进行定量分析,参考*质量标准对原方法进行修订,本研究采用毛细管气相色谱内标法,一次进样同时测定*和*两种成分,回收率、精密度等均能满足分析要求。

1 仪器、试剂与供试品

1.1 仪器：SP-8000气相色谱仪,FID检测器,色谱工作站。电子分析天平AEG-120G（日本岛津）、BD211D（德国赛多利斯）。

1.2 对照品：*、*对照品均由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 试剂及溶剂：萘（内标）、石油醚Ⅲ均为分析纯。

1.4 供试品：活络膏样品

2 方法与结果

2.1 色谱条件

    由于供试品溶液所选用的溶媒与原*不同,故本研究根据本品的实际实验系统适应情况,选用色谱柱为PEG-20M毛细管柱30 m×0.25 mm×0.25μm,程序升温,起始温度为80℃,保持5min后每分钟升高15℃,终止温度为190℃,保持8 min,分流比50∶1。检测器温度为300℃,进样口温度为250℃。在以上色谱条件下,样品中各组分*分离。

2.2 溶液的配制

2.2.1 内标溶液和对照品溶液的制备

    取萘适量,用石油醚Ⅲ制成20 mg/ml的溶液,摇匀,作为内标溶液。另取*对照品30 mg、*对照品50 mg,精密称定,置10 ml量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,用石油醚Ⅲ溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.2 供试品溶液

2.2.2.1 供试品吸收液的选择因本品是含有挥发油成分的软膏剂,故结合本品的实际情况分别试用了甲苯、正己烷、石油醚Ⅱ、石油醚Ⅲ等溶媒作为吸收液进行提取样品中挥发油成分及测试。结果甲苯对本品中α-蒎烯及*精组分都有干扰;正己烷及石油醚Ⅱ的沸点较低,在挥发油提取过程中溶媒容易挥发导致被测成分损失较大;石油醚Ⅲ经测试对本品各组分均无干扰,且沸点较高,结果均可满足分析要求,故本研究选用石油醚Ⅲ作为供试品吸收液。

2.2.2.2 供试品溶液的制备取本品约200 mg,精密称定,置圆底烧瓶内,加水200 ml,玻璃珠数粒,烧瓶置电加热套内,连接挥发油测定器,自测定器上端加水至刻度3 ml,用移液管加入石油醚Ⅲ 2 ml,连接回流冷凝管,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸2 h,冷却后弃去水相,将石油醚Ⅲ吸收液通过一个铺有约1 g*的漏斗,滤至10 ml量瓶中,挥发油测定器内壁用少量石油醚Ⅲ洗涤,洗液与吸收液合并,精密加入内标溶液1 ml,用石油醚Ⅲ稀释至刻度,摇匀。

2.2.2.3 提取条件考察分别称取8份样品（20040501）,依法操作,按1、2、3、4 h不同提取时间,保持微沸提取挥发性成分。结果表明,加热微沸后保持2 h即可将样品中待测成分提取*。

2.3 线性关系考察

    取*对照品约250 mg与*对照品约425 mg,精密称定,置25 ml量瓶中,用石油醚Ⅲ溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 ml分别置10 ml量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,用石油醚Ⅲ稀释至刻度,精密吸取各浓度对照品溶液1 μl,注入气相色谱仪中,依法测定。每份进样3次,取峰面积及浓度的平均值进行计算,以各组分峰面积与内标峰面积之比为纵坐标Y,各组分浓度与内标物浓度之比为横坐标X,绘制标准曲线,进行线性回归计算,回归方程为,*:Y=0.800 90X-0.005 81,r=0.999 79;*:Y=0.526 83X-0.004 23,r=0.999 98。线性范围分别为1.003~5.016 mg/ml及1.720~8.598 mg/ml,表明各对照品浓度与其峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

    分别吸取*、*混合对照品溶液1 μl,重复进样6次,结果*RSD为0.63%,*RSD为0.45%,表明本法精密度良好。

2.5 阴性对照试验

    分别取缺*、*的阴性对照品及样品各200 mg,按供试品溶液的制备方法制备,摇匀。分别取1μl注入气相色谱仪测定,各阴性对照品与样品比较在*、*相应位置上,均无干扰现象。

2.6 稳定性试验

　　取供试品溶液,室温放置,分别按0、1、2、3、5、8 h时间点依法测定含量,结果*含量的RSD为0.11%,*含量的RSD为0.17%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

　　取同一批供试品,平行精密称取6份,依法测定含量,结果*平均含量为14.1%,RSD为0.16%;*平均含量为24.1%,RSD为0.41%,表明本法重复性良好。

2.8 回收率试验

　　取本品5份（已知含量）,每份约100 mg,精密称定,每份精密加入*对照品15 mg与*对照品25 mg,置圆底烧瓶中,依法测定含量。结果*平均回收率为98.4%,RSD为0.69%;*平均回收率为97.4%,RSD为0.78%;结果表明本方法具有良好的回收率,可用于活络膏中*、*的含量测定。

3 讨论

　　对于*、*等成分的气相色谱分析,早期多采用填充柱分别测定,采用毛细管色谱柱,以程序升温方式,一次进样可同时测定上述两种成分,方法简便,结果准确、分析快速。

　　干扰试验:分别取缺α-蒎烯、*精、樟脑、*、*与*的阴性对照品及样品各200 mg,按供试品溶液的制备方法制备,摇匀。分别取1μl注入气相色谱仪测定,各阴性对照品与样品比较在α-蒎烯、*精、樟脑、*、*与*相应位置上,均无干扰现象。