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Biochrom分光光度计测定核酸的浓度

时间：2020-11-10阅读：240
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DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。
对标准样品来说，浓度为1μg/ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02。当OD260＝1时，DNA浓度约为50μg/ml；RNA浓度约为40μg/ml；寡核苷酸浓度约为33μg/ml。
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。

核酸纯度判定（经验值）：
纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）
纯RNA：1.7＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）
计算待测样品的浓度：
DNA样品的浓度（μg/μl）：OD260×稀释倍数×50/1000
RNA样品的浓度（μg/μl）：OD260×稀释倍数×40/1000

使用Biochrom分光光度计，设定参数后，可实现直接获取核酸的浓度、OD260/OD280等多个数值，从而对样品有一个全面的判定。


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