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高首鲟虹彩病毒PCR检测试剂盒反应液的配制方法

时间:2020/10/8阅读:743
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  高首鲟虹彩病毒PCR检测试剂盒反应液的配制
 
  PCR反应体系的配置方式有时也会影响反应的正常进行。常规方法与其它酶学反应一样,在后加入DNA聚合酶。早期的PCR仪没有带加热的盖子,要求在反应液上覆盖一层矿物油,防止水分蒸发。
 
  对于使用具3’-5’外切活性的高温DNA聚合酶时,有时会扩增不出产物。在遇到这个问题时,如果将反应成分分开配制,A管含模板、引物和dNTP,以及调整体积的H2O,B管含缓冲液、DNA聚合酶和水,然后再将两管溶液混合起来,可较好地克服这个问题。
 
  按照常规的方法配制反应体系,有时会出现非特异性扩增的问题。热启动(hotstart)PCR操作方式可较好解决这一问题。将dNTP、缓冲液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蜡珠(如AmpliWaxPCRQam100),加热熔化,再冷却,使蜡将溶液封住,后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有当PCR反应进入高温阶段后,蜡层熔化,所有反应成分才会混合在一起。
 
  已开封或者使用后,剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,ELISA检测试剂盒开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。
 
  根据我司规定未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20℃。

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