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植物树叶总蛋白组织样品处理方法

时间:2020/12/2阅读:154
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  植物树叶总蛋白组织样品处理方法
 
  对多数从动物或植物组织里提取总蛋白质而言,同样没有一种通用的程序。但遵循的原则基本相同。下面列出两种提取植物树叶总蛋白程序:
 
  裂解液制备:
 
  (A),7M Urea,2M Thiourea,4%(w/v)CHAPS,40mM Tris-Base,40mM DTT,2%Pharmalyte pH3-10.
 
  (B),905M Urea, 2%(w/v)CHAPS, 0.8%(w/v)Pharmalyte pH3-10,1%(w/v)DTT and 5mM Pefabloc proteinase inhibitor;
 
  三氯醋酸-苯酮沉淀法提取植物树叶总蛋白程序:
 
  先将植物树叶置于液氮中速冻,后放置于Gd200组织研磨仪中研碎;
 
  悬浮于含10%三氯醋酸和0.07%β-巯基乙醇的丙酮溶液,-20℃冰浴;
 
  让蛋白质沉淀过夜然后离心(4℃,40,000g,1h),弃上清液;
 
  重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的冰预冷丙酮溶液里;
 
  离心(4℃,40,000g,1h)后真空干燥沉淀;
 
  用(A)或(B)裂解溶液溶解沉淀,离心(4℃,40,000g,1h);
 
  Brandford法定量蛋白,然后分装保存在-78℃备用
 
  超速离心法:
 
  取材;
 
  用Gd200组织研磨仪在液氮冷冻条件下将样品研成粉末,每1g样品加入0.5ml裂解液,使用Gd200高通量组织研磨仪研磨匀浆30s;
 
  组织悬液15℃,10,000×g离心10min;
 
  上清液4℃,150,000×g超速离心45min;
 
  小心避开上层漂浮的脂质层,吸取离心上清6℃40,000g再次离心50min;
 
  取离心上清。Brandford法定量蛋白,分装后置-75℃保存。

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