HIF-a人肺细胞培养说明书

对于贴壁细胞，若细胞漂浮：培养瓶不开封，用75%酒精擦拭后平躺置于培养箱内。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，换成新鲜的培养基；如细胞还不贴壁，将细胞离心收集移到新的培养瓶中，原培养瓶加部分新鲜培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。对于悬浮细胞：收到细胞后，将细胞全部离心，去掉旧的培养基，换成新鲜的培养基继续培养。

特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触，建议添加双抗培养）

（1）贴壁细胞收到当天有少量或没有飘忽的细胞可以当天换液，因为路途颠簸造成大量飘忽的情况时，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

（2）收到细胞后请尽快更换为含10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间zui长不宜超过72小时）

（3）如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并江林技术人员

细胞接收后的操作流程与注意事项：

1）贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（zui高不能超过20%），或可根据该细胞生长特性生长密度，考虑*消化后，转移到新的培养瓶继续培养

2）如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时实验室技术人员会跟进解决

3）生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）

（1）吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%*进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）

（2）注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

（3）取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

（4）镜下观察消化情况，在细胞生长特性边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉*，加6-8ml*培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。