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检测实验中标记蛋白有哪些优点

时间:2020/1/9阅读:358
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  根据上海古朵生物技术实验室过程了解到,检测实验中标记蛋白在测定过程中,具有一定的优点。这些优点为我们做实验提供便捷快速的服务流程,作为标记物一般用于两个目的:
 
  ①蛋白检测:即标记物的引入使得能够检测细胞表达系统中的标记蛋白,从而可对蛋白的功能、蛋白质在细胞的定位以及相互作用和生化活性进行研究;
 
  ②蛋白纯化:即选择一种可以与某种固相化配体结合的标记物,从而可以从细胞抽提物中批量纯化蛋白。
 
  标记蛋白具有许多优点。原则上,该方法为检测各种细胞成分中感兴趣的蛋白提供厂新的手段。
 
  ①如果开放阅读框已经被克隆化,但是由于蛋白是新发现的,或者由于蛋白免疫原性较弱,  目前尚没有针对该蛋白产物的抗体时,此标记技术具有重要的应用价值。随着基因组的研究,由基因工程进入蛋白工程,标记技术显得越来越重要。
 
  ②标记物可用于免疫沉淀试验,由于抗标记物抗体的高度特异性,可以检测结合在标记蛋白上的其他感兴趣的目的蛋白。
 
  ③只要具备适当的载体,标记蛋白可在任何细胞中进行表达;例如,相同的标记蛋白既可在细菌中表达,又可在昆虫细胞系统中表达。
 
  4标记技术可用于纯化表达的蛋白,其特点是由于洗脱方法非常温和,可以纯化活性蛋白或蛋白复合物。
 
  ⑤由于标记物不是天然蛋白氨基酸序列的固有部分,与标记物结合的试剂在进行蛋白提纯过程中,对蛋白功能产生影响的可能性较小。
 
  ⑥因为每个标记物是*的,有可能在同一细胞表达系统中同时表达多种标记物以研究蛋白质之间的相互作用或进行共定位(colocalization)。也可以使用多种标记物对同一蛋白或蛋白复合物进行纯化,如按顺序地使用2种标记物纯化蛋白质时,可取得较好的效果。
 
  ⑦标记物的定位特性以及与其他分子的相互作用,可通过稳定转染细胞中的表达进行监测。标记物用于细胞染色和免疫印迹中检测蛋白,对区分内源性的未标记蛋白和外源性蛋白效果较好。
 
  随着标记物技术的广泛应用,已出现了范围越来越广泛的商品化产品,极大地推动了该技术的发展。表位作图和新的标志蛋白以及蛋白和配体相互作用研究的成功,导致了大量新的标记系统不断出现,然而目前还没有适用于各种研究所需的标记物。在某些研究工作中,有必要使用多种不同的标记物,以证明标记物是否对蛋白活性产生影响

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