GV3101 农杆菌感受态细胞实验方法

模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链 DNA 模板，PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不*， DNA 双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热 DNA 聚合酶的活力， zui高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间：退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物 不能与模板牢固结合.
DNA 扩增效率下降；
温度低产量高，但过低可造成引物与模板 错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的zui适退火温度，可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，退火时间一般为 30~60 秒，足以使引物与模板之间*结 合，长时间退火没有必要。
产品名称延伸温度与时间：
PCR 反应的延伸温度一般选择在 70~75℃之间，延伸时间根据所用 聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增 2 Kb 片段，若使用 Taq 酶只需 1 分钟，使用 Pfu 酶则应设定 2 分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现，时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：
可根据模板 DNA 的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设 定 20-40 个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加， 非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：
50 μL 反应体系可用 0.5-5 U 酶，酶量的选择与模板 DNA 的量，扩增片段大 小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高 保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。
详细介绍：

GV3101 农杆菌感受态细胞10×100μL实验方法使用方法：
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR  dNTP, 10× 3uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
GV3101 农杆菌感受态细胞10×100μL实验方法使用方法：
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR  dNTP, 10× 3uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
大鼠脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   DPD ELISA Kit  Human anti-toxoplasma(tox)antibody(IgM)ELISAkit    人抗弓形体(tox)抗体(IgM)ELISA Kit
人D-乳酸ELISA Kit   Human D-lactic acid ELISA Kit  Human anti-toxoplasma(tox)antibody(IgG)ELISAKit    人抗弓形体(tox)抗体(IgG)ELISA Kit
发动蛋白2(DNM2)ELISA试剂盒   *   ，英文名：   DNM2 ELISA Kit  Human anti-liver cytosolantibody type 1,LC1ELISA Kit    人抗肝细胞胞质1型抗体(LC1)ELISA Kit
速激肽受体3(TACR3)ELISA试剂盒   进口原装   ，英文名：   TACR3 ELISA Kit  Human epidermal basement membrane zone,EBMZELISA Kit    人抗表皮细胞基底膜抗体(EBMZ)ELISA Kit
小鼠脂氧合酶同工酶1(LOX-1)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   LOX-1 ELISA Kit  Human anti-typhus antibody ELISA Kit    人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISAKit
大鼠总*(TC)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   TC ELISA Kit Human Candida Albicans(C.albicans)IgE antibody ELISA Kit    人抗白色念珠菌(C.albicans)IgE抗体 ELISA Kit
小鼠S100钙结合蛋白B(S100B)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   S100B ELISA Kit  Human anti-albumin antibody,AAA ELISAKit    人抗白蛋白抗体(AAA)ELISAKit
异柠檬酸裂解酶（ICL)测试盒   紫外分光光度法  50管/48样  Human β2-glycoproteinI(β2-GPI)antibody IgM ELISA kit    人抗β2糖蛋白I(β2-GPI)抗体(IgM)ELISAKit
Maestro蛋白(MRO)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   MRO ELISA Kit  Human β2-glycoproteinI(β2-GPI)antibody IgG ELISA kit    人抗β2糖蛋白I(β2-GPI)抗体(IgG)ELISAKit
小鼠组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)ELISA Kit   MouseHistone deacetylase 4,HDAC4 ELISA kit Human anti-alpha-Fodrin antibody IgG ELISA Kit    人抗α-胞衬蛋白抗体(IgG)ELISA Kit
泛素D(UBD)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   UBD ELISA Kit  Human anti-UACA antibody IgG ELISA Kit    人抗UACA抗体(IgG)ELISA Kit
大鼠基质细胞衍生因子4(SDF4)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   SDF4 ELISA Kit  Human anti U1 small nuclear ribonucleoprotein70kDa(SNRNP70)antibody ELISA kit    人抗U1小核核糖核蛋白70kDa(SNRNP70)抗体ELISA Kit
大鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   BGP/Gehrelin ELISA Kit  Human anti-TNF-alpha autoantibody ELISAkit    人抗TNF-α自身抗体ELISA Kit
小鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒   进口分装   ，英文名：   LEP ELISA Kit  Human anti-SSB/La antibody ELISA Kit    人抗SSB/La抗体ELISA Kit
N-α-乙酰转移酶50(NαA50)ELISA试剂盒   进口原装   ，英文名：   NαA50 ELISA Kit  Human SS-A/Ro antibody ELISA kit    人抗SS-A/Ro抗体ELISA Kit
信号素4C(SEMA4C)ELISA试剂盒   进口原装   ，英文名：   SEMA4C ELISA Kit  Human anti-SSA/Ro antibody ELISA Kit    人抗SSA/Ro抗体 ELISA Kit
大鼠轴突生长诱向因子1    (Ntn1)ELISA Kit    大鼠轴突生长诱向因子1     96T 痉挛性截瘫蛋白7/基质细胞粘附调节蛋白抗体    SPG7    痉挛性截瘫蛋白7/基质细胞粘附调节蛋白抗体     0.2ml
毒蛇因子    Cobra venom factor,CVFELISA Kit    毒蛇因子     96T NDRG1    英文名称：    分化相关基因NDRG1抗体     0.1ml
小鼠粘蛋白/粘液素5B   MUC5B ELISA Kit     小鼠粘蛋白/粘液素5B    96T 调亡诱导因子抗体   AIF    调亡诱导因子抗体     0.1ml
兔子催乳素    PRL (Rabbit prolactin)ELISA Kit    兔子催乳素     96T Cy3标记的兔抗鸡IgM    Rabbit Anti-chickenIgM/Cy3    Cy3标记的兔抗鸡IgM     0.1ml
大鼠乳酸脱氢酶    (LDH)ELISA Kit    大鼠乳酸脱氢酶     96T 分泌性磷蛋白24抗体    SPP24    分泌性磷蛋白24抗体     0.2ml
人可溶性CD38    sCD38(Human SolubleCluster of differentiation 38) ELISA Kit    人可溶性CD38    96T 嗜乳脂蛋白样2抗体    BTNL2    嗜乳脂蛋白样2抗体     0.1ml
GV3101 农杆菌感受态细胞10×100μL实验方法 人可溶性CD21    CR2/sCD21(Human Soluble Cluster ofdifferentiation 21) ELISA Kit    人可溶性CD21     96T 发育相关蛋白ERCC6L抗体（乙醇致畸因子）    ERCC6L    发育相关蛋白ERCC6L抗体（乙醇致畸因子）     0.2ml
大鼠抗髓鞘相关糖蛋白抗体    (MAG Ab)ELISA Kit    大鼠抗髓鞘相关糖蛋白抗体     96T 人肌酸激酶同工酶MB    CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme)ELISA Kit    人肌酸激酶同工酶MB     96T
兔子促黄体激素    LH (Rabbit luteotropichormone) ELISA Kit    兔子促黄体激素     96T 胸腺基质淋巴细胞生成素-1抗体    TSLP    胸腺基质淋巴细胞生成素-1抗体     0.1ml
小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽    PACAP ELISA Kit     小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽     96T LRIG1抗体    LRIG1   LRIG1抗体     0.2ml