1.  用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次，每次30s；

      2.  在室温中用3%甲醛/PBS固定20min；

      3.  用PBS液再漂洗3次，每次1min，后用滤纸吸干多余的PBS液；

      4.  投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；

      5.  用PBS漂洗3次，每次1min，后用滤纸吸干多余的PBS液；

      6.  向直径6cm的干净碟皿*滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，于37℃生化培养箱中放置45min—1h；

      7.  向碟皿内匀速缓慢滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子夹出，按步骤3处理；

      8.  向干净碟皿*滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗，其后操作按步骤6进行；

      9.  按步骤7和3操作；

      10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上，把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上；

      11. 将盖片置于荧光显微镜下观察；