各位小伙伴都听说过死体积吧。死体积越大，导致样品扩散的空间很大，色谱峰会更容易展宽，峰形变差。那么死体积该如何定义呢，死体积大小如何计算，这里小编就给各位小伙伴做个介绍。
死体积的定义
死体积狭义上指的是色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置(进样口)到检测位置(检测器流通池)这一段的体积(PS:除去色谱柱中填料体积)，一旦色谱柱连接，这段体积(图示橙色管路)是不变的(死的)。
HPLC中色谱柱死体积该如何计算
对于HPLC来说，该如何计算死体积呢。
死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据，Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通过色谱柱的时间。
测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液(方法中会有规定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流动相得到的溶液，也有直接用100%色谱纯甲醇进样的情形)时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间(t0)，这就是t0的实测结果。
然后通过计算得到系统死体积:
死体积(V0) = 死时间t0×流动相的流速F。
减小死体积的注意事项
在我们使用或维护的过程中，如果涉及管路等配件的更换，应该选择与原规格一致的配件，以确保死体积与原来一致，避免死体积的增加而带来峰形的展宽。
接装色谱柱时，需确保管线接头匹配完好(特别注意peek管接头的使用，以及管线与色谱柱的连接处)避免形成接头空腔(如下图)。
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